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卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤之一，发病率在妇科生殖系统肿瘤中居第二位。但由于发病隐匿，临床治疗常规疗法效果欠佳，因此其致死率最高。随着肿瘤治疗学的发展，肿瘤的免疫治疗及靶向治疗渐成实验研究的重点，但这也就要求无论针对何种肿瘤进行治疗，都首先要找到这种肿瘤的肿瘤特异性/相关抗原。 人类α型叶酸受体(FOLR-1)是一种锚定于细胞膜上的糖蛋白，已被证实能够以高出正常表达量20～90倍的水平，持续性高表达于90％以上的卵巢上皮性肿瘤中。并且，通过对其蛋白质肽链的研究，发现其E39和E41等几个区，能有效地激活肿瘤相关淋巴细胞(tumor associated lymphocyte，TAL)中细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的活性，产生针对肿瘤的免疫应答。因此，FOLR-1已被认为是一种适用于卵巢癌免疫治疗的靶抗原。 在本研究工作第一部分中，我们对FOLR-1基因进行克隆及真核表达载体的构建。首先，提取卵巢癌细胞株SKOV3的RNA；根据SKOV3中FOLR-1的cDNA序列设计一对引物，并经RT-PCR扩增出FOLR-1的DNA编码序列，测序证实与文献报道完全一致；将它克隆人真核表达载体pcDNA3．1(+)，构建重组真核表达载体pcDNA-FR1；转化HO-8910细胞后，再次利用RT-PCR技术在转录水平对其进行表达情况的检测；结果从转化细胞中成功扩增出插 第四军医大学硕士学位论文 一 人的FOLR－l基因。 第二部分中，我们又将得到的FOLR－l 基因克隆人融合表达载体 pGEM4T毛，转化大肠杆菌 DHS a，经 IPTG诱导，电泳后在 SDS－PAGE中 相对分于量约 55 KD处出现了一条新生蛋白条带；Western Blot证实，该蛋白 为融合了GST的FOLR刁蛋白。光密度扫描结果表明，表达产物占菌体蛋白 的 11．5％，表达产物的相对分子量为 55 KD，以包涵体形式存在。 同位素放射免疫检测是卵巢癌筛查和病情监测的重要手段，而肿瘤的免 疫治疗及靶向治疗是临床肿瘤治疗学的发展方向。这两者的发展与提高，都 需要更特异，更灵敏的肿瘤抗原及其检测手段的发现。本研究克隆、融合表 达了一种新的卵巢癌相关抗原一FOLRl，并成功构建真核／原核表达载体， 为进一步在临床上通过检测血清中抗体早期发现卵巢癌患者和制备卵巢肿瘤 DNA疫苗用于卵巢癌的治疗奠定了基础。