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目的:1.观察乳腺癌新辅助化疗前后肿瘤间质浸润淋巴细胞(s TILs)和程序性死亡受体配体-1(PD-L1)表达情况及变化,分析其与临床疗效及临床病理特征的关系。2.观察乳腺癌新辅助化疗前后s TILs亚型(CD4+s TILs、CD8+s TILs、FOXP3+s TILs)表达的变化,分析其与临床疗效及临床病理特征的关系。方法:1.收集2015年1月-2019年10月遵义医科大学附属医院病理科经新辅助化疗乳腺癌病例106例,所有患者均在新辅助化疗前行乳腺粗针穿刺活检,经组织病理确诊为浸润性乳腺癌(非特殊类型),新辅助化疗结束后行乳腺癌根治术,依据按Miller-Payne(MP)系统进行分级,其中MP 5级,即新辅助化疗后达到病理完全缓解(p CR)26例,未达病理完全缓解(non-p CR)80例。2.对新辅助化疗前粗针穿刺活检标本及新辅助化疗后手术标本组织行苏木素-伊红(HE)染色、免疫组化染色(IHC),在HE染色切片上评估s TILs浸润百分比,采用免疫组织化学染色(Envision两步法)分别检测肿瘤组织间质浸润免疫细胞(ICs)中PD-L1(Ventana SP142)、CD8+s TILs、CD4+s TILs、FOXP3+s TILs的表达情况。3.对患者进行随访,观察新辅助化疗前后PD-L1、s TILs、CD8+s TILs、CD4+s TILs、FOXP3+s TILs的变化,探讨其与临床病理特征及预后的关系。4.采用SPSS 18.00进行数据统计分析,卡方检验及Fisher确切概率法进行两分类变量相关性分析,非正态连续变量比较采用非参数U检验和W检验,单因素和多因素分析采用二元Logistic回归进行分析,配对分类资料的一致性和差异性分析分别采用Kappa检验和Mc Nemar检验;采用Kaplan-Meier法比较各组的DFS及OS。应用Graphpad Prism 8.0软件进行作图,以P<0.05为差异具有统计学意义。(注:1、符号“△”定义为前后表达变化;2、ns无意义P>0.05,*显著水平P<0.05,**显著水平P<0.01,***显著水平P<0.001。)结果:1.患者基本临床特征及与新辅助化疗疗效(p CR率)的关系:106例女性乳腺癌平均年龄为(47.3±9.4)岁(29~72岁),分子分型中Luminal A型37例(34.9%),Luminal B型29例(27.4%),HER2(3+)型24例(22.6%),三阴性乳腺癌(TNBC)16例(15.1%)。其中有26例(24.5%)新辅助化疗后达到p CR,Luminal A型、Luminal B型、HER2(3+)型、TNBC型患者p CR率分别为8.1%、20.7%、41.7%、43.8%。新辅助化疗后p CR率与新辅助化疗前肿瘤体积小(P=0.04)、雌激素受体(ER)阴性(P=0.003)、HER2阳性(P=0.022)、PD-L1表达(P=0.015)及高水平s TILs(P=0.001)正相关,差异有统计学意义。2.新辅助化疗前后PD-L1的表达及其变化与临床病理特征关系:乳腺新辅助化疗前PD-L1的表达与ER阴性(P=0.012)、无淋巴结转移(P=0.021)、高水平s TILs(P=0.003)正相关;新辅助化疗后PD-L1的表达与无淋巴结转移(P=0.007)、高水平s TILs(P=0.007)正相关。新辅助化疗前后PD-L1阳性率分别为18.8%,32.5%,新辅助化疗后阳性转为阴性病例10例,前后不变49例,阴转阳21例。3.新辅助化疗前后s TILs的浸润水平及其变化与临床病理特征关系:未达p CR的80例乳腺癌患者中有29例s TILs升高,8例降低,而新辅助化疗前s TILs水平与组织学分级较低(P=0.002)、ER表达(P=0.002)、分子分型(P=0.004)、无脉管侵犯(P=0.005)相关。△s TILs与患者年龄较小(P=0.025)及无淋巴结转移(P=0.026)正有关。新辅助化疗后CD8+s TILs、CD4+s TILs浸润增加,FOXP3+s TILs浸润减少,肿瘤细胞ki-67降低。在新辅助化疗前,p CR组CD4+s TILs、CD8+s TILs、FOXP3+s TILs浸润比例明显高于non-p CR组。PD-L1(+)组CD4+s TILs、CD8+s TILs、FOXP3+s TILs浸润水平明显高于PD-L1(﹣)组(中位数:50 vs 15,P<0.001;40 vs 20,P=0.002;13 vs 8,P=0.004)。新辅助化疗后s TILs浸润增加组的△CD4+s TILs、△CD8+s TILs(符号△定义为表达变化)变化明显高于s TILs浸润不变组、s TILs浸润减少组(P<0.001);新辅助化疗后s TILs浸润增加组的△FOXP3+s TILs减少变化明显低于s TILs浸润不变组、s TILs浸润减少组(P<0.001)。新辅助化疗后PD-L1转阳组)的△FOXP3+s TILs减少明显低于PD-L1不变组(P<0.01)、PD-L1转阴组(P<0.001)。单因素分析(P=0.0001)及多因素分析(P=0.006)均显示新辅助化疗前CD4+s TILs浸润水平与临床疗效(p CR率)正相关。4.乳腺癌患者不同分组的生存分析:对106例新辅助化疗乳腺癌患者随访,其间失访5例,剩余101例中位随访时间29个月(14~77个月),14例发生结局事件(6例复发,8例死亡)。Kaplan-Meier生存分析:ER阳性患者的DFS显著长于ER阴性患者(P=0.01),p CR组对non-p CR组未显现出更长DFS(P=0.194),新辅助化疗后PD-L1(+)组对PD-L1(﹣)组未显现出更长DFS(P=0.107),而△FOXP3+s TILs降低组的DFS明显优于△FOXP3+s TILs升高组(P=0.024)。s TILs不同变化组(△s TILs)间、PD-L1不同变化组(△PD-L1)间、△CD4+s TILs组间、△CD8+s TILs组间及△FOXP3+s TILs组间均未显示出明显差异及优势。结论:1.乳腺癌肿瘤免疫相关指标s TILs和PD-L1可以预测新辅助化疗反应,较高水平的s TILs和PD-L1表达可获得更佳的化疗疗效;2.新辅助化疗既能促进肿瘤微环境中杀伤肿瘤免疫细胞(CD4+s TILs、CD8+s TILs)的浸润,又能抑制微环境中促肿瘤淋巴细胞(FOXP3+s TILs)的浸润;3.新辅助化疗前后PD-L1的变化与临床病理参数无相关性。