目的:通过检测双氢杨梅树皮素(APS)对体外培养的人视网膜母细胞瘤细胞株(HXO-RB44)增殖的影响,观察细胞凋亡、线粒体跨膜电位、细胞内活性氧(ROS)的变化,探讨APS诱导人视网膜母细胞瘤(RB)细胞凋亡的氧化作用机制。方法:取对数生长期的人HXO-RB44进行实验。1.观察APS干预下细胞的生长曲线:设7个不同药物浓度(50.00、33.33、22.22、14.84、9.90、6.60、4.40)μg/ml和空白对照组,分别作用0、24、48、72h后,绘制生长曲线图。2.观察APS对细胞增殖的抑制作用:7个浓度的APS干预RB细胞24h后,观察其形态学变化, MTT法、软琼脂克隆形成法观察RB细胞的体外抑制作用。3.AO/EB染色观察细胞凋亡形态学变化:选取3个不同浓度(50.00、14.84、4.40)μg/ml的APS干预RB细胞24h后,染色,荧光显微镜观察,并拍照。4.流式细胞仪检测细胞凋亡:设3个药物浓度组(50.00、14.84、4.40)μg/ml和空白对照组,作用24h后,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。5.流式细胞仪检测线粒体跨膜电位及ROS的变化:选取对数生长期细胞培养,设3个药物浓度组和空白对照组培养24h后,染色,流式细胞仪检测线粒体跨膜电位及ROS的变化。结果:1.APS干预后,RB细胞的生长受到明显抑制,随着药物浓度的增加呈剂量依赖性;作用24h时抑制作用最明显。2.通过倒置显微镜可观察到RB细胞出现形态学的变化。细胞的IC50为14.71μg/ml;药物浓度为9.9μg/ml以上时单细胞克隆形成抑制率为100﹪,药物浓度为4.4μg/ml,抑制率为52.2﹪。3.AO/EB荧光染色,药物作用后出现了明显的凋亡细胞,表现为细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂等凋亡特征性的形态学改变。4.APS对细胞凋亡有明显的诱导作用。药物作用24h后的凋亡率分别为88.13%、58.46%、14.83%,各浓度组凋亡率与空白对照组(4.82%)比较,差异均有显著性(P<0.05),各浓度组细胞凋亡率之间差异也均有显著性(P<0.05)。5.APS能降低RB细胞线粒体跨膜电位。APS处理24h后不同浓度组(50.00、14.84、4.40、0)μg/ml的平均荧光强度分别为20.70、55.63、88.57和146.53,药物组与空白对照组比较差别有统计学意义( P均< 0. 01),三个浓度之间差异有统计学意义( P < 0. 01)。6.APS能促进RB细胞内ROS的产生。APS处理24h后不同浓度组(50.00、14.84、4.40、0)μg/ml的平均荧光强度分别为54.87、43.03、36.80和20.93,药物组与空白对照组比较差别有统计学意义( P均< 0. 01),三个浓度之间差异有统计学意义( P < 0. 01)。结论:1.APS对RB细胞的体外增殖有明显的抑制作用。2.APS可诱导体外培养的RB细胞凋亡。3.APS诱导RB细胞凋亡与线粒体内跨膜电位的下降、细胞内ROS产生增加有关。