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胶质瘤(Glioma)是包涵星形胶质细胞肿瘤、少突胶质细胞肿瘤和室管膜细胞肿瘤等不同细胞类型和不同病理等级的一类神经外胚层肿瘤。在全球每年新增的中枢神经系统原发肿瘤中,脑胶质瘤最为常见。尽管在手术和放射治疗方面已经取得进步,但总体预后仍然较差。近年来化疗在恶性胶质瘤的治疗中逐步受到重视,患者对于化疗的敏感性及耐药性的差异目前成为研究的重点。基因芯片研究为分析筛选差异表达基因提供了有效的技术手段,分析验证基因芯片结果并从中找出真正有临床意义者需对每个基因以及其相关通路和蛋白进行深入的研究。我科教授对长征医院手术治疗并行基因芯片检测的胶质瘤病例长期随访,分析芯片数据,依据疾病与相关基因数据库,通过生物信息学技术筛选出化疗相关的差异表达基因20余条,细胞周期蛋白G2(Cyclin G2, CCNG2)即是其中之一。细胞周期蛋白G2主要作用是阻滞细胞周期进程。越来越多的证据提示CCNG2基因可能是一个重要的抑癌基因,抑制肿瘤细胞增殖,并参与部分肿瘤化疗的生物学过程。目前CCNG2在胶质瘤中的研究鲜有报道。为了了解CCNG2在人脑胶质瘤组织中的表达情况,及其与患者病理及预后等临床特征的关系,本实验通过研究临床病例组织中及TMZ、VM26化疗药物处理前后CCNG2 mRNA和蛋白表达水平的变化,并利用重组CCNG2慢病毒载体转染U251细胞株研究U251细胞细胞周期及对化疗药物敏感性受CCNG2过表达的影响变化,从而初步探讨CCNG2在胶质瘤发生发展及化疗药物作用等生物学机制中所起作用。本实验共分为两个部分：第一部分、CCNG2在脑胶质瘤组织中的表达及临床意义的研究目的：比较CCNG2在不同WHO病理级别脑胶质瘤组织中表达水平的差异性,并分析CCNG2表达水平差异与胶质瘤患者预后的关系。方法：qRT-PCR检测CCNG2 mRNA在不同等级脑胶质瘤组织的表达水平。并分析其mRNA转录水平的差异性与胶质瘤病理级别的相关性。免疫组化染色检测不同级别脑胶质瘤石蜡标本中CCNG2蛋白表达情况。随访患者生存时间,利用Kaplan-Meier及Cox生存分析检验CCNG2表达水平同患者预后的关系。结果：CCNG2在高级别(WHOⅢ-Ⅳ级)胶质瘤组织中mRNA转录水平明显下调,与低级别(WHOⅠ-Ⅱ级)胶质瘤相比差别显著(P<0.05)。免疫组化法检测了脑胶质瘤CCNG2的蛋白表达情况。在脑胶质瘤细胞胞质中可见CCNG2蛋白染色,而且不同病理级别脑胶质瘤的CCNG2的表达差异显著,高级别胶质瘤组织阳性率低于低级别组(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析71例星形胶质瘤患者生存期,提示CCNG2高表达患者预后好于低表达者,Cox分析提示CCNG2表达水平可作为胶质瘤患者的独立预后判断因素(p<0.05)结论：CCNG2在脑胶质细胞瘤存在阳性表达,低级别脑胶质瘤中CCNG2表达水平明显高于高级组。CCNG2蛋白染色阳性的胶质瘤患者的预后较好。第二部分、CCNG2过表达对U251细胞株细胞周期的影响及与化疗关系的实验研究目的：研究和探讨过表达CCNG2对U251细胞化疗敏感性的影响。方法：应用CCNG2慢病毒载体、空载体分别转染体外培养的U251人胶质瘤细胞株,正常培养U251细胞作为空白对照。qRT-PCR和Western-blot检测转染前后加用化疗药物的U251细胞CCNG2 mRNA和蛋白表达水平的变化情况；流式细胞仪检测CCNG2过表达的U251细胞株细胞周期分布情况。MTT法(噻唑兰比色分析法)检测U251中转染前后加用化疗药物后细胞增殖生长情况变化。结果：与对照组U251细胞和转染空白载体的U251细胞相比,qRT-PCR和Western blot结果显示,转染重组CCNG2病毒载体的U251细胞CCNG2 mRNA和蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。流式细胞仪分析细胞周期分布显示转染CCNG2病毒载体的U251细胞被抑制在G0/G1期。MTT法检测细胞增殖率发现,CCNG2过表达的U251细胞生长速率明显下降,过表达组化疗处理后生长速率下降明显。结论：外源性CCNG2过表达可使U251细胞发生G1期阻滞,并提高U251细胞对TMZ和VM26的化疗敏感性。