Brachyury基因突变模型小鼠胚胎发育中Wnt、FGF信号通路相关基因表达研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:zdt19880709
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Brachyury对调控小鼠胚胎发育,尤其是中胚层的构建发挥着关键作用,缺乏Brachyury蛋白的小鼠胚胎不能正常发育,Brachyury突变小鼠表现出短尾表型。Wnt和FGF信号通路在小鼠胚胎发育中可控制胚胎的轴向发育、EMT等重要的生理过程,Brachyury可能通过与上述两种信号通路的相互作用而导致小鼠短尾表型的产生。为了揭示Brachyury与Wnt及FGF信号通路潜在的相互作用关系。本实验首先使用一种便捷地合成RNA原位杂交探针的方法,对不同发育阶段野生型整体小鼠胚胎进行原位杂交,观察了Brachyury在小鼠胚胎各个发育阶段的位置表达情况。通过提取不同发育时期的Brachyury基因突变模型小鼠胚胎的总RNA,运用荧光定量PCR技术,检测Brachyury基因、Wnt和FGF两种信号通路相关基因的表达情况。实验结果如下:(1)Brachyury的表达在正常小鼠胚胎7.5dpc开始逐渐上调,并在9.5dpc达到峰值,随后表达量逐渐降低,而Brachyury突变小鼠胚胎的Brachyury表达趋势与野生小鼠胚胎的表达情况一致,但表达量明显低于同期野生型胚胎;(2)Ainx2在野生型胚胎的表达水平明显高于突变型;(3)Dkk1的表达趋势与Brachyury的表达相似且突变型胚胎的表达峰高于野生型胚胎;(4)Wnt3的表达从8.5 dpc开始野生型胚胎显著高于突变型;(5)野生型Wnt3a、FGF4在9.5 dpc的表达水平均显著高于突变型并形成表达峰。因此,Brachyury作为转录因子对两种信号通路组份的表达具有调节作用,而且它们形成一定的反馈回路及调控网络调控小鼠胚胎的正常发育。本实验揭示了Brachyury与Wnt、FGF信号通路相关组份的潜在关系,一定程度上为小鼠胚胎发育期间Brachyury(T)的功能研究提供了理论基础。
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