目的:石斛,始载于《神农本草经》,历代以霍山石斛为道地,被誉为中药材中的―软黄金‖。(1)针对目前市场上石斛来源众多,质量良莠不齐的问题,考察古今石斛种质与质量评价的沿革与变迁,为霍山石斛的质量评价提供本草学依据;(2)针对目前霍山石斛混伪品众多的现象,有必要提供一种快速鉴别霍山石斛及其近缘种的方法;(3)探明霍山石斛及其近缘种茎中生物碱和香豆素类化合物的分布与组织结构的关系。方法:通过查阅历代本草,对石斛的种质、道地产区、加工及用法、质量评价等方面进行考证;对霍山石斛及其最易混淆用品铁皮石斛、铜皮石斛和河南石斛,分别测量它们茎的各节间长度、直径、维管束数目,并观察茎横切面特征,比较它们的性状和显微特征。此外,对19种石斛属植物的茎进行横切面显微结构比较研究;在显微结构研究的基础上,针对霍山石斛、铁皮石斛、铜皮石斛和河南石斛,运用组织化学定位和显微拉曼光谱的方法,定性判别生物碱和香豆素类化合物在霍山石斛及其近缘种茎中的分布规律。结果:(1)考证了石斛的历代质量评价沿革与变迁。石斛的种质自古就有广义和狭义之分,广义的石斛是指石斛属及其近缘属植物的总称,狭义的石斛有时指只生长在石头上的石斛属植物,有时又特指某种或某几种石斛;霍山石斛自清代以来,就被推崇为道地药材。石斛种质不同、加工方法不同,其临床应用各有侧重。枫斗的商品规格可能始自清代,到现在已经成为石斛商品的主流形态。石斛药材来源众多,历代本草认为石斛以质重、黏齿、无渣者质量优良。(2)发现了霍山石斛及其近缘种的快速鉴别研究方法。在性状鉴别上,霍山石斛与河南石斛、铁皮石斛、铜皮石斛存在一定差异。根据茎的总长度、总节数、各节间长度与直径及其变化趋势可以将霍山石斛及其近缘种区分来。其中最主要的区别点是霍山石斛第2节与第3节直径的变化趋势最大。在显微鉴别上,霍山石斛及其近缘种植物茎的各节间维管束数目呈现一定的变化规律,霍山石斛与铜皮石斛茎中维管束数目从基部开始逐级减小,河南石斛与铁皮石斛茎中维管束数目从基部向上,呈现先增加后减小的趋势;在维管束数目上,铁皮石斛维管束数目最多,铜皮石斛次之,霍山石斛与河南石斛维管束数目较少。此外,霍山石斛及其近缘种在茎的表皮细胞加厚程度、纤维的多少、有无硅质块等方面也存在一定差异。(3)运用显微特征开展石斛属19种植物茎的鉴别。19种石斛类药材茎的横切面结构存在一定共性,属于典型的单子叶植物茎的结构。但是不同种之间,其组织的细节特征还存在一定差异。主要表现在角质层厚度、表皮细胞加厚程度、有无皮下细胞、维管束的个数及类型、草酸钙晶体类型及分布位置、有无硅质块等方面。(4)开展了霍山石斛及其近缘种的组织化学研究。组织化学定位研究表明,改良碘化铋钾、碘-碘化钾和苦味酸三种生物碱沉淀剂对霍山石斛、河南石斛、铁皮石斛和铜皮石斛茎中生物碱的检测反应具有高度的一致性。该4种植物茎中生物碱主要存在于维管束和除粘液细胞外的部分薄壁细胞中。其中铜皮石斛和河南石斛生物碱含量要高于霍山石斛和铁皮石斛。霍山石斛、河南石斛、铁皮石斛和铜皮石斛的茎经乙醇梯度洗脱溶解香豆素前后的荧光反应结果差异不大,表明该4种石斛茎中香豆素含量较低或不含香豆素。霍山石斛及其近缘种的拉曼谱图大致分为两种,经过与拉曼标准谱库对比,推测样品中可能含有7-二乙胺基-4-甲基香豆素、纤维素和淀粉。以7-二乙胺基-4-甲基香豆素的1156 cm-1和1522 cm-1信号强度生成霍山石斛拉曼成像,结果表明霍山石斛香豆素类成分主要分布在维管束鞘的细胞壁及薄壁细胞的细胞壁中。结论:(1)本草考证发现,古代本草记载石斛分味甘和味苦两种,其临床应用不同;石斛的辨状论质观认为石斛以质重、黏齿、味甘、无渣者为佳,该特征与霍山石斛一致,从而揭示了霍山石斛为道地药材的本草学依据。(2)采用性状与显微鉴别相结合的方法,可以很好的鉴别霍山石斛与河南石斛、铁皮石斛和铜皮石斛。―龙头凤尾‖的加工方式,揭示了霍山石斛“辨状论质”的科学内涵,体现了古人保护道地药材的意识。(3)霍山石斛及其近缘种茎中生物碱成分主要分布于维管束和除粘液细胞外的部分薄壁细胞中。本文创新点:(1)通过本草考证,石斛的质量评价应以“质重、黏齿、味甘、无渣”为佳,揭示了霍山石斛为道地药材的本草学依据,石斛类药材中味甘者与味苦者的临床应用应各有侧重;(2)利用性状与显微鉴别相结合的方法,有效快速鉴别霍山石斛及其近缘种,同时揭示了霍山石斛―龙头凤尾‖的科学内涵;(3)初步判明出霍山石斛及其近缘种生物碱及香豆素类化合物的分布,为其质量评价与资源利用奠定了基础。