转PmHSP25.3基因香石竹植株耐热性研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wp87825385
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香石竹(Dianthus caryophyllus L.),也称康乃馨(carnation),观赏价值高,作为四大切花之一,在花卉市场上有很大的销量。原产地中海沿岸,喜阴凉、干燥环境。在我国,夏季高温,会影响到切花品质,因此培育耐热品种是香石竹的重要育种目标之一。本研究是以香石竹品种‘想向’为材料,通过根癌农杆菌介导法向香石竹中导入梅花小热激蛋白PmHSP25.3基因,在抗性筛选、PCR检测基础上,获得转基因植株,并对转基因植株和对照在高温胁迫下生理生化指标的变化进行了相关研究。主要研究结果如下:1、遗传转化研究将香石竹叶片接种在分化培养基MS+1.Omg/L BA+0.3mg/L NAA上预培处理2d,然后用农杆菌侵染8-12min,在含100mmol/LAS的培养基上共培处理3d,转入加有60mg/L Kan+400mg/L Cef选择培养基上继续培养,当长出的抗性芽高度达1cm左右时,转入MS+O.lmg/L NAA+25mg/L Kan+400Cef的生根培养基上生根。在遗传转化时,不同农杆菌菌株侵染带叶基叶片,所得‘想向’抗性芽再生率有较大差异。EHA105菌株侵染所得再生率约达到3.33%,而GV3101约为0.41%。对抗性植株进行DNA提取,PCR检验,在2个株系中检测到目的基因条带。2、高温胁迫耐热性研究将转基因和对照香石竹组培苗进行不同温度处理,结果表明,转基因香石竹幼苗致死温度为49℃,非转化苗为45℃。在38℃高温下,分别胁迫0、2、4、6、8d,胁迫后剪取叶片,冷冻保存,测定其生理生化指标。结果表明:高温胁迫处理后,转基因香石竹组培苗叶片中可溶性蛋白质、可溶性糖含量、SOD活性均高于对照,而叶绿素总量、丙二醛含量低于对照。
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