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研究目的:血液中单核细胞进入外周组织后在不同刺激因素作用下可分化为经典激活的巨噬细胞(M1)和选择性激活的巨噬细胞(M2)。研究报道,肿瘤组织中巨噬细胞具有M2型巨噬细胞表型;原发性肝癌切除患者,其肿瘤组织中巨噬细胞浸润增多提示术后预后不良;在肝癌组织中,细胞毒性T细胞浸润增多是无病生存期和总生存期改善的独立预后因素。为了进一步观察和了解肿瘤微环境中巨噬细胞对细胞毒性T细胞的影响,从而进一步明确巨噬细胞在肿瘤发生发展中所起的作用,我们设计了该实验。研究方法:构建Wistar大鼠Walker-256肝癌模型。将大鼠分为3组:A组(腹腔注射氯磷酸盐脂质体)、B组(腹腔注射PBS脂质体)、C组(腹腔注射生理盐水)。干预12天后摘取肿瘤组织,测量肿瘤大小、观察腹腔肿瘤转移及腹水情况;应用免疫组化方法检测肿瘤组织、癌周组织及癌远端组织中浸润的CD68,CD163,CD8及GranzymeB P日性细胞个数(表达CD68、CD163的细胞为巨噬细胞,表达CD8,GranzymeB的细胞为T细胞);应用CD8与Tunel双标方法检测肿瘤组织中T细胞的凋亡。研究结果:1 A、B、C三组的肿瘤体积分别为:(0.13±0.09)cm3、(0.27±0.14)cm3、(0.41±0.36)cm3;肿瘤重量分别为:(0.16±0.14)g、(0.31±0.13)g、(0.34±0.35)g;腹腔转移阳性率分别为0%,42.86%,33.33%;腹水阳性率分别为0%,42.86%,33.33%。三组间比较,差异无统计学意义(p>0.05)。2未进行干预的大鼠,其癌组织、癌旁肝组织及癌远端肝组织中,CD68阳性细胞个数分别为:(134.29±35.45)、(41.72±13.62)、(38.20±13.43),癌组织分别与癌旁肝组织、癌远端肝组织比较,差异有统计学意义(p<0.05)。CD163阳性细胞个数分别为:(47.84±1.61)、(32.55±31.23)、(31.66±17.68);CD8阳性细胞个数分别为:(104.95±35.77)、(119.14±28.24)、(106.12±19.57);GranzymeB阳性细胞个数分别为:(11.48±6.60)、(13.13±1.84)、(12.39±1.62)。CD163、CD8、GranzymeB阳性细胞数,三组之间差异无统计学意义(p>0.05)。3 A、B、C三组中,CD68阳性细胞个数分别为:(91.73±22.36)、(153.88±47.66)、(134.29±35.45),A、B组之间比较,差异有统计学意义(p<0.05)。CD163阳性细胞个数分别为:(34.43±9.32)、(53.33±1.45)、(47.84±1.61),A、B组之间比较,差异有统计学意义(p<0.05)。CD8阳性细胞个数分别为:(194.52±71.60)、(183.36±59.96)、(104.95±35.77),A、C组之间,B、C组之间,差异均有统计学意义(p<0.05)。Granzyme阳性细胞个数分别为(26.88±1.14)、(18.44±6.70)、(11.48±6.60),A、C组之间比较,差异有统计学意义(p<0.05);其余各组间比较,差异无统计学意义(p>0.05)。4相关分析显示,肿瘤组织中CD68与CD8阳性细胞之间呈负相关(r=-0.221,p=0.030);CD163与GranzymeB阳性细胞之间呈负相关(r=-0.464,p=0.030);CD163与CD8阳性细胞之间无相关性(r=0.224,p=0.316);CD68与GranzymeB阳性细胞之间无相关性(r=0.017,p=0.939)。5 A、B、C三组中T细胞(CD8)凋亡率分别为:(3.63±1.49)、(6.60±6.60)、(9.42±4.40),其中,A组和C组之间,差异有统计学意义(p<0.05):其余各组间比较,差异无统计学意义(p>0.05)。结论:1氯磷酸盐脂质体组大鼠肝癌组织中巨噬细胞浸润明显低于PBS脂质体组和生理盐水对照组。提示,氯磷酸盐脂质体可有效清除肝癌组织中巨噬细胞。2氯磷酸盐脂质体组大鼠肝癌组织中细胞毒性T细胞浸润明显高于PBS脂质体组和生理盐水组。提示,巨噬细胞被清除后T细胞浸润增多;间接提示,巨噬细胞抑制T细胞的浸润。3氯磷酸盐脂质体组大鼠肝癌组织中细胞毒性T细胞凋亡明显低于PBS脂质体组和生理盐水组。提示,巨噬细胞被清除后T细胞凋亡减少;间接提示,巨噬细胞可促进T细胞凋亡。