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猪瘟（classical swine fever,CSF）是由猪瘟病毒（classical swine fever virus,CSFV）引起的一种高热、出血以及高死亡率的急性、烈性传染病,一旦爆发将给养猪业造成巨大的经济损失。该病被世界动物卫生组织（OIE）列为需申报的疫病名录,我国将其列为一类动物疫病。猪瘟病毒属于黄病毒科、瘟病毒属成员,是有囊膜的、基因组为单股正链的RNA病毒,病毒粒子较小,表面的三种囊膜糖蛋白Erns、E1和E2与衣壳C蛋白共同组成病毒的结构蛋白。另外,病毒基因组仍编码8种非结构蛋白,所有蛋白在病毒复制周期中单独或者协同发挥功能。已有研究显示,CSFV通过网格蛋白介导的内吞作用侵入宿主细胞,但其利用哪种囊膜糖蛋白与内化受体作用介导这一过程的发生仍然未知。本研究旨在明确E2蛋白在CSFV内化中的作用。通过慢病毒系统构建稳定表达重组E2蛋白的悬浮细胞系,利用亲和层析的方法纯化重组蛋白。SDS-PAGE和Western blotting分别鉴定了重组E2蛋白的表达水平及其反应原性。通过感染、吸附以及内化试验探究了E2蛋白对CSFV感染、吸附以及内化的影响。将重组E2蛋白免疫BALB/c小鼠制备多抗,利用制备的抗E2多抗与CSFV感作后进行吸附和内化试验,进一步探究了E2蛋白在介导CSFV吸附和内化中的作用。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,表达E2蛋白的悬浮细胞系构建成功,且表达的重组E2蛋白能够被特异性单克隆抗体WH303所识别。通过优化表达条件,细胞培养至第8天时悬浮293细胞系上清中蛋白浓度最高,可达5.84μg/mL,且具有阻断CSFV感染的活性。利用重组E2蛋白在病毒侵入过程中处理细胞对CSFV的感染具有显著抑制作用;中和试验结果显示,制备的抗E2多抗具有良好的中和活性;吸附和内化试验表明,重组E2蛋白处理细胞后能够显著抑制CSFV的内化,而利用抗E2多抗与CSFV感作后能够显著抑制其吸附。综上所述,构建的悬浮293细胞系能够稳定表达重组E2蛋白,且通过该重组E2蛋白和抗E2多抗证明E2蛋白参与CSFV的内化。