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目的:对nm23-H1及其突变基因进行扩增,构建真核重组载体pEGFP-nm23-H1、pEGFP-nm23-H1 C4S、pEGFP-nm23-H1 CallS,研究其抗病毒增敏活性与诱导癌细胞晚期凋亡活性,并比较NDPK-A及其突变体的活性差异。方法:以pBV220-nm23-H1、pBV220-nm23-Hl C4S、pBV220-nm23-H1 CallS质粒作为模板,通过设计合适的引物进行PCR扩增目的基因,Xho I与EcoR I双酶切后插入pEGFP内构建重组载体;重组载体转染细胞后,Western blot确定NDPK-A及其突变体在细胞内的表达,DAPI染色与激光共聚焦法对NDPK-A及其突变体在细胞内的定位;重组载体pEGFP-nm23-H1、pEGFP-nm23-H1 C4S与空载体pEGFP转染vero细胞,G418筛选稳定细胞株,CPE与空斑法检测其抗病毒增敏活性;重组载体pEGFP-nm23-H1、pEGFP-nm23-H1 C4S、pEGFP-nm23-H1 CallS与空载体pEGFP瞬时转染A549细胞,PI染色,流式细胞仪分选绿色荧光表达细胞,检测A549的晚期凋亡率。结果:测序鉴定表明成功构建重组载体,转染细胞后NDPK-A及其突变体均有表达,并且处于细胞的胞浆中;重组载体转染Vero细胞后,成功构建了稳定细胞株,并且对稳定细胞株进行的CPE检测与病毒空斑法检测均表现NDPK-A及其突变体对抗病毒药物核苷类似物具有增效作用,且NDPK-A C4S>NDPK-A野生型;瞬时转染A549细胞后NDPK-A及其突变体均能促使A549癌细胞凋亡,且凋亡率NDPK-A C4S>NDPK-A CallS>NDPK-A野生型。结论:成功构建了重组载体,对进行NDPK-A及其突变体体外研究做了前期准备;转染细胞后NDPK-A及其突变体均有表达,并且处于细胞的胞浆中,为研究其在细胞的活性提供了前提条件;与NDPK-A野生型相比,NDPK-A突变体在抗病毒增敏活性、促癌细胞凋亡活性方面均得到不同程度增强,这为nm23-H1/NDPK-A活性调控以及基因治疗研究奠定了基础,也开拓了美好前景。