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骨形态发生蛋白2(Bone morphogenetic proteins-2, BMP2)最早是作为调节骨形成的重要因子而被发现的,它对骨骼的胚胎发育和再生修复起重要作用。现在研究认为,它参与调节许多种细胞的增殖、分化和凋亡的生物学过程,越来越多的研究显示BMP2信号通路参与多种肿瘤的进展。本研究旨在以腺病毒为载体转染BMP2至舌癌Tca8113细胞,观察舌癌细胞系Tca8113在转染BMP2后生物学行为的变化,检测转染前后BMP-SMAD通路的变化,来探讨BMP2对于舌癌细胞生物学行为的影响及其分子生物学调控机制,以寻求更为有效的基因治疗方法。目的观察BMP2对于舌癌细胞生物学行为的影响,研究BMP-SMAD通路对舌癌细胞的调控作用,并建立舌癌动物模型,观察BMP2对裸鼠舌癌移植瘤的治疗作用。方法1.舌癌细胞的培养：复苏舌癌细胞系Tca8113, RPMI1640体外培养,观察细胞的形态及增值活性。2.观察BMP2对Tca8113细胞的作用和机制：利用不同浓度重组腺病毒介导的BMP2基因转染Tca8113细胞,Western blot检测不同组Tca8113细胞中BMP2、Smad1/5表达的差异。3.观察BMP2对Tca8113细胞生物学行为的影响：利用腺病毒介导增强型绿色荧光BMP2基因转染至Tca8113细胞,观察细胞形态的改变,检测细胞增值活性的改变,检测Smad的通路作用途径。4.体内实验：于SCID鼠腹股沟皮下建立肿瘤模型,肿瘤形成后,采用腺病毒介导的BMP2基因作瘤内注射,观察肿瘤体积的变化。结果1.舌癌细胞培养：Tca8113细胞生长稳定,形态正常,肿瘤细胞增值较快,约于第3天进入对数生长期,第5天进入平台期。2.腺病毒介导的BMP2基因转染Tca8113细胞后,Western blot检测到不同组细胞间的BMP2、Smad1/5的表达有明显的差异,转染组BMP2的浓度越高,Smadl/5的表达量越高。3.腺病毒介导增强型绿色荧光BMP2基因转染至Tca8113细胞后,16h即可见到绿色荧光表达,以后逐渐增强,48h后可见到较强的荧光表达,病毒MOI为100时,转染效率较高,细胞形态未见明显变化,MTT检测细胞增值活性明显降低,荧光在细胞质及细胞核中表达明显。4.SCID鼠皮下移植瘤于2周后长大到直径平均约0.6cm,瘤内注射腺病毒介导的BMP2基因,肿瘤生长受到明显抑制,各组肿瘤大小有明显差异。结论1.以腺病毒为载体的BMP2成功转染至Tca8113细胞,并进行Western blot鉴定,表明目的蛋白已整合到Tca8113细胞中,并进行有效地表达。2.BMP2蛋白转染至舌癌Tca8113细胞,能显著提高Smad1和Smad5蛋白的表达。3.BMP2对舌癌Tca8113细胞的增值有明显的抑制作用,其信号由Smad1/5蛋白由细胞外转导进入细胞核,进而在细胞核中发挥其调节作用。4.BMP2对舌癌Tca8113细胞形态没有明显的影响。5.舌癌动物模型构建成功,BMP2对SCID鼠移植瘤生长有明显的抑制作用。