论文部分内容阅读
目的：探讨视网膜变性过程中，视网膜组织内不同细胞因子如碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)，和神经因子包括脑源性神经营养因子(brain-derived netlrotrophic factor，BDNF)、睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor，CNTF)和神经营养素-3(neurotrophin-3，NT-3)动态表达的变化特点，分析不同因子变化与视网膜变性的内在关系，为退行性眼底病的防治提供参考依据。
方法：以出生后0～4周龄的rd小鼠(病变组)和C57BL小鼠(正常对照组)为研究对象，分别选取生后当天(标记为生后0周龄，post-nata10 week，PN-OW)，1周龄(PN-1W)，2周龄(PN-2W)，3周龄(PN-3W)和4周龄(PN-4w)共计5个时间点为观察点，在每个时间点上各取10只(20只眼)，采用脱臼法处死后，5秒内即刻摘除眼球，显微手术法操作取出视网膜组织，提取mRNA及蛋白，采取RT-PCR和Western blotting方法，分别对不同时间点、不同组别的视网膜组织内BDNF，bFGF，CNTF，NT-3在mRNA和蛋白质水平的表达情况进行测定。
结果：在正常对照组，在小鼠视网膜从PN-OW至PN-4W的发育过程中，四种因子在mRNA水平的表达呈逐渐上升至—稳定程度的趋势。在5个时间点上，BDNF在mRNA水平的表达强度(用相对灰度值表示，下余同)为0.3508，0.5596，0.5677，0.6108，0.5393(低→高→高→高→低)。bFGF的相对灰度值为0.3534，0.5442，0.6362，0.4990，0.4651(低→高→高→高→低)。CNTF的mRNA水平的表达的相对灰度值为0.3519，0.5462，0.7401，0.9073，0.8314(低→高→高→高→低)。NT-3相对灰度值为0.3629，0，6099，0.8316，0.6597，0.5485(低→高→高→低→低)。而在病变组小鼠视网膜组织内，自PN-OW开始，四种因子在mRNA水平的表达就明显高于正常对照组。随着视网膜变性的发展，四种因子的mRNA表达水平明显高于正常对照组。在5个时间点上，BDNF的相对灰度值为0.5934，0.5423，0.8076，0.7521，0.6467(高→低→高→高→低)。bFGF的相对灰度值为0.5142，0.5353，0.7016，0.9598，0.6036(低→高→高→高→低)。CNTF的相对灰度值为0.6329，0.6670，0.7233，0.8031，0.7253(低→高→高→高→低)。NT-3的相对灰度值为0.6079，0.5831，0.9362，0.8885，0.7421(高→低→高→高→低)。在正常对照组小鼠视网膜内，四种因子在蛋白质水平的表达在从PN-OW至PN-4W的发育过程中，呈现由较少量表达逐渐上升到视网膜发育基本成熟时略有下降。在5个时间点上，BDNF的相对灰度值为0.3581，0.4822，0.5572，0.5704，0.5425(低→高→高→高→低)。bFGF的相对灰度值为1.9405，2.1295，2.5574，2.4562，2.4092(低→高→高→低→低)。CNTF的相对灰度值为0.2774，0.3664，0.3410，0.3773，0.3688(低→高→高→高→低)。NT-3的相对灰度值为0.4280，0.5683，0.5169，0.5347，0.5535(低→高→低→高→高)。而病变组四种细胞因子的蛋白表达自出生始终明显低于正常对照组。在5个时间点上，BDNF的相对灰度值为0.3218，0.3269，0.4361，0.3877，0.3695(低→高→高→低→低)。bFGF的相对灰度值为2.0297，2.1096，1.9703，1.8749，1.8827(低→高→低→低→低)。CNTF的相对灰度值为0.2196，0.2948，0.3181，0.2813，0.1793(低→高→高→低→低)。NT-3的相对灰度值为0.3722，0.3847，0.3727，0.3803，0.4221(低→高→低→高→高)。
结论：视网膜变性过程中四种因子的mRNA表达均明显高于正常组，提示此可能因视网膜感光细胞凋亡和死亡激发了RNA水平的反馈性增高，以期防止感光细胞凋亡的发生。而视网膜变性过程中四种因子蛋白质表达明显低于正常组，提示视网膜变性组织内可能存在蛋白质翻译过程的缺陷，以此诱发了视网膜变性过程中感光细胞凋亡和死亡的病理过程。