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研究目的:探讨灯盏花素和二氢杨梅素对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激的影响,初步探讨其作用机制,并进一步观察灯盏花素和二氢杨梅素对高糖环境NO水平的影响。
研究方法:
CCK-8法检测灯盏花素和二氢杨梅素对HUVEC活性的影响;利用荧光探针DCFH-DA标记HUVEC内ROS并结合激光共聚焦显微镜技术测定荧光强度;用硝酸还原酶法测细胞上清液中NO3-+NO2-含量来反映NO水平;用MESACUP@蛋白激酶试剂盒检测HUVEC胞浆和胞膜的PKC活性。
研究结果:
1.不同浓度的灯盏花素或二氢杨梅素(10-9、10-7、10-5M)分别处理HUVEC48小时及72小时,与正常细胞相比,存活率无显著性差异。
2.高糖组细胞ROS较正常对照组相比增高,而甘露醇对照组与正常对照组相比无显著性差异。灯盏花素或二氢杨梅素对照组与正常对照组相比均无显著性差异。与高糖组比,浓度为10-9、10-7、10-5M的灯盏花素或二氢杨梅素干预组细胞ROS均降低,与正常对照组相比无显著性差异,且三个不同浓度药物干预组之间均无显著性差异。
3.100nM PMA处理正常对照组细胞1.5h后,ROS较正常对照组增高,而灯盏花素或二氢杨梅素均可以完全抑制这种现象,100nM PMA处理灯盏花素或二氢杨梅素干预组细胞1.5h后,ROS水平与正常对照组相比无显著性差异。与高糖组相比,100nM PMA处理高糖组细胞1.5h后刺激ROS增加,而灯盏花素或二氢杨梅素不仅能完全抑制这种现象,还能降低ROS至正常对照组水平。
4.与正常对照组细胞相比较,高糖处理组细胞胞浆PKC活性(PKCc)增高,胞膜PKC活性(PKCm)明显增高,且胞膜活性占总活性百分比(PKCm/PKCt)升高。与高糖组比,10-9M灯盏花素干预组PKCc、PKCm、PKCm/PKCt均降低。而10-9M二氢杨梅素干预组细胞的PKCc、PKCm及PKCm/PKCt与高糖组比较均无显著性差异。
5.与正常对照组比较,高糖作用HuVEC48h后,NO水平显著降低。10-9M灯盏花素对照组和10-9M二氢杨梅素对照组细胞NO水平与正常对照组相比无显著性差异。10-9M灯盏花素干预组的NO水平较高糖组显著升高,而10-9M二氢杨梅素干预组细胞的NO水平较高糖组略有升高,但与高糖组相比无显著性差异。
研究结论:
1.灯盏花素和二氢杨梅素对人脐静脉内皮细胞的活性均无明显影响。
2.灯盏花素和二氢杨梅素均可降低高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激。
3.灯盏花素可抑制高糖环境下人脐静脉内皮细胞的PKC活性,二氢杨梅素对高糖环境下人脐静脉内皮细胞的PKC活性无抑制作用。
4.灯盏花素可抑制高糖环境下人脐静脉内皮细胞NO水平降低,而二氢杨梅素对高糖引起的NO降低无明显影响。