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目的制备大鼠双侧颈总动脉永久性结扎(Bilateral Common Carotid Artery Occlusion,BCCAO)模型,观察BCCAO诱导的慢性低灌注早期不同时间海马CA1区内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)信号传导通路PERKe IF2α-ATF4-CHOP的变化;并进一步研究促凋亡信号JNK/c Jun是否参与了BCCAO诱导的PERK-e IF2α-ATF4-CHOP内质网应激损伤,及长期生理剂量雌激素17β-雌二醇(17-β-estrodiol,E2)替代治疗的影响,为临床治疗由于慢性低灌注所引起的血管性痴呆等疾病提供新策略。方法1制备去势成年雌性大鼠BCCAO动物模型:SPF级成年雌性SD大鼠行双侧卵巢切除术(bilateral ovariectomy,OVX),术后1周行分阶段双侧颈总动脉永久性结扎术(BCCAO)从而诱导慢性低灌注模型,实验动物随机分为sham(14d、21d)组;BCCAO(14d、21d、28d)组;持续生理剂量E2处理组、SP600125处理组和溶剂对照组(vehicle,1%DMSO)。2 Western blot法检测海马CA1区内质网应激标志性蛋白及其下游相关凋亡因子GRP78、ATF4、CHOP的表达和PERK、e IF2α、JNK、c-Jun的磷酸化水平以及雌激素干预后的变化。3采用激光扫描共聚焦显微镜技术观察E2及SP600125对BCCAO后CHOP与凋亡启动蛋白Cleaved caspase 3水平的影响。结果1 BCCAO诱导的慢性低灌注对海马CA1区神经元内质网应激相关因子表达的影响。Western blot结果显示,与sham 14d组相比,BCCAO后14d、21d、28d GRP78蛋白水平无显著差异(P>0.05);而BCCAO后14d、21d、28d海马CA1区PERK、e IF2α磷酸化水平及ATF4蛋白表达较sham14d组显著升高(P<0.05)。2 BCCAO对海马CA1区内质网凋亡蛋白CHOP及促凋亡JNK-c Jun信号通路的影响。Western blot结果显示与sham 14 d组相比,CHOP蛋白水平及JNK、c-Jun磷酸化水平于BCCAO后时间依赖性持续升高(P<0.05),而JNK和c-Jun非磷酸化(总蛋白)水平与各个时间点与sham 14 d相比均无显著差异(P>0.05)。3JNK特异抑制剂SP600125和生理剂量E2对BCCAO后内质网应激蛋白水平的影响。BCCAO后21d处理组和溶剂对照组PERK、e IF2α磷酸化水平及ATF4蛋白表达较sham 21d组显著升高,而SP600125和生理剂量E2均可显著逆转此变化(P<0.05)。4 JNK抑制剂SP600125和生理剂量E2对海马CA1区CHOP和JNK-c Jun信号的影响。Western blot结果显示,BCCAO 21d和溶剂对照组CHOP蛋白表达和JNK、c Jun磷酸化水平较sham 21d组显著升高,给予SP600125和生理剂量E2可阻断CHOP的升高和JNK/c Jun信号的激活(P<0.05)。5激光扫描共聚焦显微镜结果显示,BCCAO后21d海马CA1区CHOP荧光染色强度较sham 21d组显著增强,且主要定位在细胞核;BCCAO后21d及溶剂对照组Cleaved caspase 3阳性染色细胞数较sham 21d组显著增加,并大多Cleaved caspase 3阳性细胞与CHOP共定位,少数呈现CHOP/Cleaved caspase-3/Neu N三者共定位;E2和SP600125可有效逆转此影响。结论脑慢性低灌注可诱导海马CA1区长期的内质网应激,其可能通过激活JNKc Jun信号通路及CHOP活性从而导致神经元凋亡,长期生理剂量E2可显著降低此变化。