【摘 要】
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本研究以中国人源贾第虫病毒（GLV）基因组为基础,构建GLV与GFP的嵌合体,优化GLV表达外源基因的顺式作用元件;克隆贾第虫GDH启动子并对其转录活性进行了鉴定;构建NEO抗性盒pGDH5/
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本研究以中国人源贾第虫病毒（GLV）基因组为基础,构建GLV与GFP的嵌合体,优化GLV表达外源基因的顺式作用元件;克隆贾第虫GDH启动子并对其转录活性进行了鉴定;构建NEO抗性盒pGDH5/NEO/GDH3并转染贾第虫,通过G418筛选获得抗性虫株;以G418为筛选标记,构建贾第虫DNA稳定转染载体,建立DNA稳定转染方法;首次将GLV高效表达外源基因的顺式作用元件置于GDH启动子下游,构建GLV转录盒,将GLV转录盒与NEO抗性盒串联获得GLV载体pGLV,线性化pGLV后电穿孔转染贾第虫北京株,通过G418筛选建立了抗性虫株,经核酸检测发现线性质粒pGLV已整合入贾第虫基因组,而GLV和GFP的嵌合体则以双链RNA的形式存在;遗传稳定性分析表明该抗性虫株具有较好的遗传稳定性;并且证实GFP在贾第虫体内得到了表达,并且主要以分泌蛋白的形式表达,表达GFP能与兔抗GFP血清发生反应;经（NH4）2SO4沉淀、凝胶过滤层析柱纯化后其纯度达85.3%,蛋白质浓度测定表明在培养上清中目的蛋白含量为0.56g/L。该表达系统具有表达量高、表达产物易于纯化的特点,从而为外源基因在真核细胞中的表达提供了新的方法。
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