【摘 要】
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研究基础:1、课题组前期将高分化人胃癌MKN28细胞株进行分组,分别为转染KAI1基因慢病毒RNA干扰载体p LKD-CMV-EGFP-2A-Puro-U6-sh RNA（KAI1）的实验组（KAI1-si RNA组）、转染空病毒载体p LKD-CMV-EGFP-Puro-U6-sh RNA的阴性对照组（MKN28-NC组）以及未做特殊处理的空白对照组（MKN28-Ctrl组）,病毒感染72小时后
【基金项目】
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贵州省科技计划项目（黔科合 SY 字[2013]3001）; 遵义医科大学硕士启动基金（编号:F-961）
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研究基础:1、课题组前期将高分化人胃癌MKN28细胞株进行分组,分别为转染KAI1基因慢病毒RNA干扰载体p LKD-CMV-EGFP-2A-Puro-U6-sh RNA（KAI1）的实验组（KAI1-si RNA组）、转染空病毒载体p LKD-CMV-EGFP-Puro-U6-sh RNA的阴性对照组（MKN28-NC组）以及未做特殊处理的空白对照组（MKN28-Ctrl组）,病毒感染72小时后荧光显微镜下观察各组细胞中绿色荧光蛋白EGFP的表达,并通过加药筛选方法建立稳定转染的细胞株。2、课题组前期选取4-6周龄雌性裸鼠36只,随机分为6组,每组6只,将各组高分化人胃癌MKN28细胞株分别接种于裸鼠腹腔,细胞量为1×107个/ml,应用小动物彩色超声检测仪探测裸鼠腹腔移植瘤生长和转移情况,成功构建裸鼠移植瘤模型。目的:探讨KAI1抑癌基因在体内、外对人胃癌MKN28细胞系上皮-间质转化的影响及其可能的作用机制。方法:1、通过q PCR方法分别从体内、外检测裸鼠移植瘤组织及人胃癌MKN28细胞系中KAI1、Wnt/β-catenin信号通路关键分子（β-catenin）和EMT相关分子（E-cadherin、N-cadherin）m RNA的转录水平。2、通过Western blot方法分别从体内、外检测裸鼠移植瘤组织及人胃癌MKN28细胞系中KAI1、Wnt/β-catenin信号通路关键分子（β-catenin）和EMT相关分子（E-cadherin、N-cadherin）蛋白的表达情况。3、采用IHC检测各组移植瘤组织中β-catenin、E-cadherin和N-cadherin蛋白的表达,并测量其MOD值。结果:1、q PCR结果显示,KAI1-si RNA组细胞及移植瘤组织中KAI1 m RNA的相对表达量低于MKN28-NC组及MKN28-Ctrl组（P＜0.05）;KAI1-si RNA组细胞及移植瘤组织中EMT上皮标记物E-cadherin m RNA的相对表达量低于MKN28-NC组及MKN28-Ctrl组（P＜0.05）,而间充质标记物N-cadherin m RNA相对表达量高于MKN28-NC组及MKN28-Ctrl组（P＜0.05）;KAI1-si RNA组细胞及移植瘤组织中Wnt/β-catenin信号通路的关键分子（β-catenin）m RNA相对表达量高于MKN28-NC组及MKN28-Ctrl组（P＜0.05）,NC组和Ctrl组比较均无显著差异（P＞0.05）。2、Western blot结果显示,KAI1-si RNA组细胞及移植瘤组织中KAI1蛋白的相对表达量低于MKN28-NC组及MKN28-Ctrl组（P＜0.05）;KAI1-si RNA组细胞及移植瘤组织中EMT上皮标记物E-cadherin蛋白的相对表达量低于MKN28-NC组及MKN28-Ctrl组（P＜0.05）,而间充质标记物N-cadherin蛋白的相对表达量高于MKN28-NC组及MKN28-Ctrl组（P＜0.05）;KAI1-si RNA组细胞及移植瘤组织中Wnt/β-catenin信号通路关键分子（β-catenin）蛋白的相对表达量高于MKN28-NC组及MKN28-Ctrl组（P＜0.05）;NC组和Ctrl组比较均无显著差异（P＞0.05）。3、各组移植瘤组织的IHC结果提示,E-cadherin蛋白MOD值低于MKN28-NC组及MKN28-Ctrl组（P＜0.05）;KAI1-si RNA组移植瘤组织中β-catenin和N-cadherin蛋白MOD值高于MKN28-NC组及MKN28-Ctrl组（P＜0.05）;NC组和Ctrl组比较均无显著差异（P＞0.05）。结论:1、KAI1与E-cadherin蛋白在裸鼠移植瘤组织及胃癌细胞株中的表达呈正相关,与N-cadherin蛋白的表达呈负相关;沉默KAI1基因表达可能促进胃癌细胞上皮-间质转化过程;2、KAI1与β-catenin蛋白在裸鼠移植瘤组织及胃癌细胞株中的表达呈负相关;KAI1基因参与胃癌细胞上皮-间质转化过程可能受Wnt/β-catenin信号途径负向调控。
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