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血管低反应性(vascular hypo-reactivity)是导致重症休克(severeshock)患者顽固性低血压与重要脏器组织灌注不足的主要原因,是重症休克导致多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunctionsyndrome, MODS)、乃至多器官衰竭(multiple organ failure, MOF)的重要原因之一。淋巴循环作为循环系统的一个重要组成部分,近年来在重症休克发病学中的作用备受国内外学者的关注。研究表明,结扎重症失血性休克大鼠的肠淋巴管阻断肠淋巴液回流,可减轻肝、肾、心、肺等重要器官的组织学损伤,减少重要器官组织炎症因子的产生,降低自由基损伤、一氧化氮表达与中性粒细胞扣押;将休克肠淋巴液引流至体外,可减轻重要器官的组织学损伤,改善能量代谢;这些均表明肠淋巴液在休克多器官损伤的发病学中具有重要意义。而休克肠淋巴液回流是否参与血管低反应性的发生?肠淋巴液与血管反应性的关系如何?均是当前危重病医学领域迫切需要解决的难题。为此,本研究通过复制失血性休克大鼠模型,来观察肠淋巴管结扎或肠淋巴液引流对失血性休克(hemorrhagic shock, HS)大鼠血管反应性与钙敏感性的影响,同时观察引流的休克肠淋巴液对正常大鼠离体血管环对去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)反应性的影响,多层面探讨休克肠淋巴液在休克血管低反应性中的作用。取72只Wistar雄性大鼠,随机均分为Sham组(仅常规手术,不行肠淋巴管结扎及引流术)、Shock组(经股动脉匀速放血至MAP40mmHg,复制HS模型)、Shock+Ligation组(复制HS模型,行肠淋巴管结扎)、Shock+Drainage组(复制HS模型,行肠淋巴液引流),均n=18。记录所有动物在不同时间点给予NE(3μg?kg-1)后平均动脉血压(mean blood pressure, MAP)的差值变化。且所有大鼠在维持低血压3.0 h(Sham组于相应时间点)后,制备肠系膜上动脉(superiormesenteric artery, SMA)血管环(均n=36);采用离体血管环张力测定技术,观察离体SMA血管环对梯度浓度NE的反应性变化(n=6);应用高钾液使SMA血管环去极化后,观察SMA血管环对梯度浓度Ca2+敏感性的变化(n=6);同时,应用钙敏感性增强剂血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ, AngⅡ)、钙敏感性抑制剂胰岛素(insulin, Ins)与SMA血管环孵育后,分别观察NE反应性(n=12)以及钙敏性(n=12)的变化。研究发现:①放血前,Shock与Sham组反映对NE升压效应的△MAP无显著性差异;放血后,Shock组在休克即刻和0.5 h△MAP显著高于Sham组,在1.5,2.0,2.5,3.0 h均显著降低;Shock+Ligation和Shock+Drainage组在休克即刻、休克0.5,1.0 h时△MAP显著高于Sham组,在2.5 h和3.0 h时显著降低;Shock+Ligation和Shock+Drainage组在休克0.5 h后多个时间点的△MAP均显著高于Shock组。②各组大鼠在休克后3.0 h或相应时间点,Shock、Shock+Ligation和Shock+Drainage组SMA血管环对NE的反应性和Ca2+的敏感性均显著低于Sham组;Shock+Ligation和Shock+Drainage组SMA血管环对NE的反应性和Ca2+的敏感性均高于Shock组。SMA与AngⅡ或Ins孵育后,Shock、Shock+Ligation和Shock+Drainage组血管反应性和钙敏性均显著低于Sham组,且Shock+Ligation和Shock+Drainage组均显著高于Shock组。取54只Wistar雄性大鼠,随机分为Sham组(n=6)、Shock组(n=6)、Shock+Ligation组(n=21)、Shock+Drainage组(n=21),维持低血压3.0 h(或相应时间点)后,Sham组和Shock组各制备6根SMA血管环,Shock+Ligation组和Shock+Drainage组各制备42根血管环,每组不重复同一动物随机选取6根SMA血管环用于钙敏感性的测定;Shock+Ligation组和Shock+Drainage组剩余的36根血管环分别与Rho激酶调节剂AngⅡ和法舒地尔(fasudil)、蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)调节剂佛波13酯(phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA)和星状孢子素(staurosporine)、蛋白激酶G(protein kinase G, PKG)调节剂8溴环鸟苷酸(8-Bromo-cGMP, 8Br-cGMP)和KT5823预孵育10 min(均n=6),观察Rho激酶调节剂、PKC调节剂、PKG调节剂对Shock+Ligation组和Shock+Drainage组SMA血管环钙敏感性的影响。Shock+Ligation组SMA血管环与不同工具药孵育后的结果显示:与AngⅡ孵育后钙敏感性显著高于Shock组、Shock+Ligation组,低于Sham组;与fasudil孵育后钙敏感性显著低于Sham组、Shock+Ligation组、AngⅡ孵育组。与PMA孵育后钙敏感性显著高于Shock组、Shock+Ligation组,但低于Sham组;与staurosporine孵育后钙敏感性显著低于Sham组、Shock+Ligation组、PMA孵育组。与8Br-cGMP孵育后钙敏感性显著低于Sham组、Shock组、Shock+Ligation组,与KT5823孵育后钙敏感性显著高于Shock组、Shock+Ligation组、8Br-cGMP孵育组,但低于Sham组。Shock+Drainage组SMA血管环与不同工具药孵育后的结果显示:与AngⅡ孵育后钙敏感性显著高于Shock组、Shock+Drainage组,低于Sham组;与fasudil孵育后钙敏感性显著低于Sham组、Shock+Drainage组、AngⅡ孵育组。与PMA孵育后钙敏感性显著高于Shock组、Shock+Drainage组,低于Sham组,与staurosporine孵育后钙敏感性显著低于Sham组、Shock+Drainage组、PMA孵育组。与8Br-cGMP孵育后钙敏感性显著低于Sham组、Shock组、Shock+Drainage组,与KT5823孵育后钙敏感性显著高于Shock组、Shock+Drainage组、8Br-cGMP孵育组,但低于Sham组。同时复制失血性休克模型,引流不同时间点的肠淋巴液,放血前0.5 h的肠淋巴液为正常肠淋巴液、放血至休克后0~0.5 h,0.5~1.0 h,1.0~3.0 h各时间点的淋巴液为休克0.5 h肠淋巴液、休克1.0 h肠淋巴液、休克3.0 h肠淋巴液。取正常Wistar雄性大鼠24只,1%戊巴比妥钠(50 mg?kg-1)肌肉注射麻醉后,无菌制备SMA血管环48根。其中:36根SMA血管环分别与浓度为10%的休克0.5 h肠淋巴液、休克1.0 h肠淋巴液、休克3.0 h肠淋巴液、正常肠淋巴液以及5%、15%休克3.0h肠淋巴液孵育20 min,观察各组SMA血管环对不同浓度NE的反应性变化(均n=6);12根SMA血管环与5%休克3.0 h肠淋巴液分别孵育40 min和60 min(n=6)后,观察5%休克3.0 h肠淋巴液不同孵育时间对正常大鼠SMA血管环NE反应性的影响。不同时间的休克肠淋巴液与正常大鼠SMA血管环孵育后,结果发现,休克0.5 h肠淋巴液在NE浓度为(10-7、10-5、10-4)mol/L时收缩性及Emax值均显著高于正常肠淋巴液组;休克1.0 h肠淋巴液组与正常肠淋巴液组比较,无统计学差异;休克3.0 h肠淋巴液组在NE浓度为(10-9、10-7、10-6)mol/L时收缩性显著低于正常肠淋巴液组、休克0.5 h和1.0 h肠淋巴液组。不同浓度的休克3.0 h肠淋巴液与正常大鼠SMA血管环孵育20 min后,15%休克3.0 h肠淋巴液组SMA对梯度浓度NE的收缩性及Emax值均显著低于正常肠淋巴液组,pD2明显降低,且对梯度浓度NE的收缩性及Emax值均显著低于5%休克3.0 h肠淋巴液组和10%休克3.0 h肠淋巴液组;5%休克3.0 h肠淋巴液组与正常淋巴液组、10%休克3.0 h肠淋巴液组比较,均无统计学差异。5%休克3.0 h肠淋巴液孵育与正常大鼠SMA孵育40 min和60 min后,对NE反应性显著低于孵育20min组;孵育60 min组在NE为10-5mol?L-1时收缩性显著低于孵育40min组。上述研究结果表明,肠淋巴管结扎或肠淋巴液引流阻断休克肠淋巴液回流,均可提高HS大鼠对NE的血管反应性,其机制与提高血管钙敏感性有关;肠淋巴管结扎或肠淋巴液引流提高钙敏感性的作用与Rho激酶、PKC、PKG有关;休克0.5 h肠淋巴液可提高正常大鼠SMA对NE的反应性,而休克3.0 h肠淋巴液可显著降低正常大鼠SMA对NE的反应性。结果也提示,休克肠淋巴液回流是大鼠血管低反应性发生的重要机制之一;以休克肠淋巴液为靶点,可为休克血管低反应性的防治提供新的策略。