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目的以去卵巢并注射D-半乳糖的大鼠为老年性痴呆早期模型,观察阿托伐他汀对大鼠额叶皮层炎症因子IL-6、TNF-α,抗氧化酶SOD2、CAT的表达及凋亡相关蛋白Bxl-2、Bax含量的影响。方法1实验动物分组选用4月龄雌性SD大鼠40只,随机分为2组:假手术组(Sham组)、去卵巢组(OVX组),其中Sham组8只、OVX组32只。Sham组为双侧去除少量卵巢上脂肪组织,OVX组为去除双侧卵巢。手术2周后,Sham组腹腔注射生理盐水0.5 ml/d;OVX组腹腔注射D-半乳糖20 mg·0.5 ml/d。注射6周后,将OVX组随机分为4组:病理对照组(OD),阿托伐他汀组(ODA),Vc+Ve组(ODV)及旋覆花组(ODI),每组8只。各组均灌胃4周,灌胃剂量如下: ODA组7.2 mg/Kg·d ,ODV组Vc 45 mg/Kg·d Ve 27 mg/Kg·d,ODI组0.9 g/Kg·d,Sham组及OD组蒸馏水1.5 ml/Kg·d。灌胃过程中Sham组继续注射生理盐水,其余4组继续注射D-半乳糖,所有各组均在灌胃4周后处死。整个实验周期共为12周(术后到处死)。2行为学测试注射D-半乳糖及生理盐水四周后,用Morris水迷宫对所有大鼠进行学习记忆训练,4次/天,共四天。注射D-半乳糖及生理盐水六周后同样条件下进行Morris水迷宫实验1天,方法同上,以后三次逃避潜伏期(escape latency)的平均值作为评价大鼠空间学习记忆能力的指标。动物处死前一天,同样条件下水迷宫实验1天,记录大鼠后三次逃避潜伏期的平均值,作为评价大鼠空间学习记忆能力的指标。3组织标本的获取及指标测定3.1组织标本的获取麻醉大鼠,开颅并迅速分离额叶皮层置于液氮中,于-80℃低温冰箱保存,用于组织总RNA和蛋白的提取。3.2 mRNA的测定用Trizol法提取额叶皮层组织总RNA。用β-actin作为内参照,RT-PCR法测定额叶皮层IL-6 mRNA、TNF-αmRNA、SOD2 mRNA、CAT mRNA的相对表达量。3.3蛋白的测定提取额叶皮层组织蛋白并用Bradford法测定蛋白含量,以每毫升样品中的毫克蛋白量(mg/ml)表示。以β-actin为内参照,用western-blotting法分别检测Bcl-2和Bax的相对含量。结果1大鼠学习记忆能力的变化各组大鼠逃避潜伏期随训练次数增加而缩短,取后三次逃避潜伏期的平均值进行观察,OVX组逃避潜伏期明显长于Sham组(P<0.05);给药后,ODA+ODV+ODI组逃避潜伏期明显短于OD组(P<0.05)。2大鼠额叶皮层IL-6 mRNA水平的变化OD组的IL-6 mRNA的相对表达量比Sham组明显升高,差异具有统计学意义;而与OD组相比,ODA组、ODV组和ODI组的IL-6 mRNA的相对表达量均明显降低;在用药各组中,ODV组的IL-6 mRNA的相对表达量与Sham组相比无显著性差异。3大鼠额叶皮层TNF-αmRNA水平的变化OD组的TNF-αmRNA的相对表达量比Sham组明显升高,差异具有统计学意义;而与OD组相比,ODA组、ODV组和ODI组的TNF-αmRNA的相对表达量均明显降低;而且三个用药组的TNF-αmRNA的相对表达量与Sham组无统计学差异。4大鼠额叶皮层SOD2 mRNA水平的变化与Sham组相比,OD组的SOD2 mRNA的相对表达量明显降低;与OD组相比,ODA组、ODV组和ODI组的SOD2 mRNA的相对表达量明显升高;在用药各组中,ODV组的SOD2 mRNA的相对表达量与Sham组相比无显著性差异。5大鼠额叶皮层CAT mRNA水平的变化OD组的CAT mRNA的相对表达量比Sham组明显降低,差异具有统计学意义;与OD组相比,ODA组和ODV组的CAT mRNA的相对表达量明显升高,而ODI组的CAT mRNA的相对表达量与OD组相比无显著性差异;在用药各组中,ODA组和ODV组的CAT mRNA的相对表达量与Sham组相比无显著性差异。6大鼠额叶皮层Bcl-2相对含量的变化OD组的Bcl-2相对表达量比Sham组明显降低,差异具有统计学意义;与OD组相比,ODA组、ODV组和ODI组的Bcl-2相对表达量无显著差异;用药各组Bcl-2相对表达量与Sham组相比均明显下降,差异具有统计学意义。7大鼠额叶皮层Bax相对含量的变化OD组的Bax相对表达量比Sham组显著升高,差异具有统计学意义;与OD组相比,ODA组、ODV组和ODI组的Bax相对表达量明显下降;用药各组Bax相对表达量与Sham组相比均无显著差异。结论1阿托伐他汀,Vc+Ve,旋覆花能改善去卵巢同时注射D-半乳糖对大鼠学习记忆能力的损伤。2阿托伐他汀,Vc+Ve,旋覆花可以改善本模型的炎症反应并提高抗氧化酶含量从而减弱氧化应激。3 OD组大鼠额叶皮层Bcl-2相对表达量降低,Bax相对表达量升高,给予各种不同药物(阿托伐他汀、Vc+Ve、旋覆花)后,大鼠额叶皮层Bcl-2相对表达量未见明显变化,而Bax相对表达量则明显降低,说明以上三种药物主要通过影响Bax的含量而发挥抗凋亡的作用。