Gln缓解运输应激雏鸡肠道氧化损伤的作用及机制研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:srepair555
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本研究以生长性能、肠道形态结构、机体抗氧化能力、线粒体功能、坏死性凋亡信号通路关键因子表达为评价指标,旨在探究运前灌服谷氨酰胺(Gln)缓解运输应激雏鸡肠道氧化损伤的作用及相关机制,研究结果对于开发功能性氨基酸增强雏鸡抗氧化能力,缓解运输应激反应具有重要意义。试验一、运输应激模型的建立试验选择120只AA健康初生雏鸡随机分成A、B两组,B组进行5 h的运输处理,A组不做运输处理。两个处理组保持相同的温热条件和密度等饲养环境。运输结束后测定血清皮质酮(CORT)、促肾上腺皮质激素(ACTH)含量、空肠黏膜Hsp70 mRNA及蛋白相对表达量,结果表明:5h运输应激处理显著升高了血清CORT、ACTH激素水平(P<0.05),空肠黏膜Hsp70mRNA及蛋白相对表达量极显著升高(P<0.01)。表明运输应激模型成功建立。试验二、运前灌服Gln对运输应激雏鸡生长性能的影响试验选取300只AA健康初生雏鸡,随机分成A、B、C、D、E 5组(每组5个重复,每个重复12只雏鸡)。运输前,A、B两组灌服1ml生理盐水,C、D、E组分别以每kg雏鸡体重0.5g、0.75g和1g的标准灌服1ml Gln生理盐水溶液,随后B、C、D、E组进行5h的运输处理,各组雏鸡均控制在相同环境条件下。处理结束后继续饲养14d,测定雏鸡生产性能。结果表明:5小时运输处理后,运输处理B组失重显著(P<0.05),而灌服Gln各组无明显失重。饲养至7日龄时,B组平均日增重、平均日采食量、饲料转化率显著低于A组(P<0.05),灌服Gln的各组雏鸡平均日增重虽显著高于B组,但仍低于对照组(P<0.05)。灌服Gln各组雏鸡平均日采食量与B组相比均有显著改善(P<0.05),其中D组与对照组间无显著差异(P>0.05);灌服0.75g/kg Gln的处理组饲料转化率与对照组无显著差异。饲养至14日龄时,B组的平均日采食量、平均日增重和饲料转化率仍显著低于A组,灌服Gln后各组雏鸡上述指标与B组相比均有显著改善,其中D、E组平均日增重和D组的平均采食量已恢复至对照水平。研究结果表明5h运输会导致雏鸡失重严重,生产性能下降,运前灌服Gln可有效缓解失重现象的发生,提高生产性能。试验三、运前灌服Gln对运输应激雏鸡肠道氧化损伤的缓解作用运输处理结束后,每个重复随机选取4只进行屠宰,采集颈静脉血和空肠黏膜,测定血清和肠粘膜中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、活性氧(ROS)含量,血清中乳酸脱氢酶(LDH),血浆中二胺氧化酶(DAO)、D-乳糖(DLA)水平;取十二指肠、空肠、回肠组织观察肠道形态结构。结果表明:运输应激可导致B组ROS、MDA、LDH水平显著升高(P<0.05),GSH-PX、SOD、CAT含量显著下降(P<0.05)。运前灌服Gln可显著改善上述指标水平(P<0.05),其中D组雏鸡血清中的ROS浓度可恢复至对照组水平;运输应激导致B组雏鸡小肠绒毛破损、水肿、断裂、脱落等现象,灌服Gln后肠道绒毛损伤情况明显改善。试验证实运输应激导致雏鸡肠道氧化损伤,运前灌服Gln可有效改善雏鸡血液激素水平与抗氧化功能,保护肠粘膜屏障功能。试验四、运前灌服Gln对运输应激雏鸡肠黏膜上皮细胞线粒体功能的影响运输处理结束后,采集空肠肠道组织,采用试剂盒提取线粒体,测定线粒体膜电位、ATP、NAD+和NADH含量。结果表明:运输应激导致B组雏鸡空肠线粒体膜电位、ATP含量、NAD+显著降低(P<0.05),NADH显著升高(P<0.05)与B组相比,运前灌服Gln可显著提高线粒体膜电位、ATP含量、NAD+(P<0.05),降低NADH(P<0.05)。试验证实运输应激导致雏鸡肠道线粒体氧化损伤,造成细胞凋亡,运前灌服Gln可有效改善雏鸡线粒体功能,减少细胞凋亡,降低应激损伤。试验五、运前灌服Gln对运输应激雏鸡肠黏膜坏死性凋亡信号通路的调控作用运输处理结束后,采集空肠黏膜,测定坏死性凋亡信号通路关键因子RIPK1、RIPK3、MLKL的表达。结果表明:运输应激显著上调了B组RIPK1、RIPK3、MLKL的mRNA及蛋白相对表达水平,与B组相比,灌服Gln可显著下调肠粘膜RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA及蛋白的表达水平(P<0.01);抑制坏死性凋亡通路,缓解肠道氧化应激损伤,完善了肠道功能。试验证实运输应激导致雏鸡坏死性凋亡信号通路关键因子显著升高,运前运前灌服Gln可以下调RIPK1、RIPK3、MLKL表达,改善细胞凋亡,缓解氧化损伤,其中灌服0.75g/kg Gln处理效果较好。
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