论文部分内容阅读
大疱性类天疱疮(BP)是一种自身免疫性炎症性疱病,炎症细胞的迁移、聚集在BP的发病中起着重要作用。趋化因子是一类控制细胞定向迁移的细胞因子。既往的研究提示多种细胞因子参与了BP的发病,但对于趋化因子在BP发病中的作用研究很少。烟酰胺、四环素和氨苯砜能有效治疗BP,但确切的作用机制尚不清楚。本文从BP患者血清中趋化因子的检测;BP抗体对角质形成细胞分泌趋化因子及凋亡的影响;烟酰胺、四环素和氨苯砜治疗BP的可能分子机制进行探讨;共分三章:第一章BP患者血清趋化因子的检测目的探讨BP发病中CC型趋化因子家族中嗜酸粒细胞趋化因子(eotaxin)、调节激活正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)、单核细胞趋化蛋白(MCP)—1和巨噬细胞炎症蛋白(MIP)—Ⅰα以及CXC型趋化因子白细胞介素(IL)—8的作用。方法用双抗体夹心ELISA法检测28例活动期BP患者与30例正常人对照血清中eotaxin、RANTES、MCP—1、MIP—la和IL-8水平。结果BP患者血清中eotaxin、MCP—1和IL—8水平明显高于正常人,患者血清中RANTES和MIP—la水平与正常人比较差异无显著性。结论BP发病中存在趋化因子的异常,eotaxin、MCP—1和IL-8可能与BP的发病有关。第二章BP IgG对角质形成细胞分泌趋化因子及凋亡的影响目的检测BP IgG与角质形成细胞靶抗原结合后一些关键趋化因子的释放情况,以及BP IgG对角质形成细胞凋亡的影响。方法应用辛酸—硫酸胺法从BP患者疱液中纯化IgG,采用免疫比浊法和SDS—PAGE法测定纯化后IgG的浓度和纯度,并用BP180ELISA试剂盒鉴定疱液纯化前后的免疫活性。将纯化的BPIgG与角质形成细胞共同作用,用双抗体夹心ELISA方法检测培养上清液中eotaxin、MCP—1和IL-8的表达情况。应用Annexin V—FITC凋亡检测试剂盒检测BP IgG对角质形成细胞凋亡的影响。结果采用辛酸—硫酸胺法,从BP患者疱液中纯化IgG的回收率为51.4%,略低于正常人血清,但两者纯度均较高。且BP患者疱液纯化前后的免疫活性不变。纯化的BP IgG以时间依赖方式、浓度依赖方式刺激角质形成细胞分泌IL-8。BP IgG不引起角质形成细胞的凋亡。结论采用辛酸—硫酸胺法从BP患者疱液中纯化IgG简便可行、纯度高,不影响免疫活性。BP IgG能刺激角质形成细胞分泌IL-8,可能参与BP的发病。第三章烟酰胺、四环素和氨苯砜治疗BP的分子机制初探目的探讨氨苯砜、烟酰胺和四环素治疗BP的抗炎作用的可能分子机制。方法以4mg/ml的BP IgG与角质形成细胞共同培养24h,孵化前分别用不同浓度氨苯砜、烟酰胺、四环素进行干预。MTT法检测各组药物对细胞增殖的影响,双抗体夹心ELISA方法检测培养上清液中IL-8的表达。结果氨苯砜、烟酰胺、四环素在药理浓度范围内均不影响细胞增殖。氨苯砜、四环素以浓度依赖方式抑制BPIgG诱导角质形成细胞分泌IL-8。结论氨苯砜、四环素可能通过抑制BPIgG诱导角质形成细胞分泌IL-8,在治疗BP中发挥抗炎作用。