论文部分内容阅读
研究目的:本研究采用阻塞性黄疸（OJ）肝损伤KM小鼠为实验研究对象,观察有氧运动对OJ肝损伤小鼠干预作用以及miRNA介导Wnt通路相关因子在肝和血液组织差异表达的比较分析。研究方法:采用本课题组构建的一种新的胆总管悬挂OJ肝损伤小鼠模型,40只雄性KM小鼠随机分为4组:假手术组（SO）、模型组（M）、有氧运动组（TM）、水飞蓟宾组（SFJB）。其中除假手术组、假手术对照组外都以总胆管悬挂至腹壁48小时构建OJ小鼠模型。水飞蓟宾组于胆总管结扎术后约3天进行水飞蓟宾灌胃,每天固定在下午4点至6点,剂量为0.4ml/次,共6周。中等强度有氧运动组小鼠训练坡度为0%,无负重,速度12m/min（75%VO2max）,每天固定训练60min,每周6天,共6周。干预结束后,取材前一晚小鼠禁食过夜,称重,麻醉完全后收集血液,处死动物分离肝组织。采用血生化检测血清中总胆红素（TBIL）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和清门冬氨酸氨基转移酶（AST）的水平;HE染色对比小鼠肝脏组织形态及结构的病理改变;免疫组织化学法检测肝脏组织wnt1、β-catenin、cyclinD1、HGF的表达以及Ki67细胞计数;荧光定量PCR检测血液和肝组织中wnt1、LRP5、β-catenin、cyclinD1、HGF的表达。研究结果:（1）HE染色显示:SO组小鼠肝细胞索呈放射状排列;M组小鼠的肝细胞发生萎缩,肝索断裂,核固缩等,间质可见红细胞堆积;SFJB组、TM运动组肝小叶完整,肝索排列整齐,无形变及坏死现象。（2）M组中TBIL、ALT、AST含量最高,TM组、SFJB组含量最低（P<0.01）;（3）qRT-PCR结果显示:与M组比较,SFJB组,TM组wnt1、LRP5、β-catenin、cyclinD1、HGF mRNA表达水平显著增加（P<0.05,P<0.01）;miRNA结果显示,与M组比较,TM组、SFJB组的miR-34a水平显著下调,具有统计学差异（P<0.05）。（4）免疫组织化学法结果显示:wnt1、β-catenin、cyclinD1、HGF在SO组中低表达,SO组β-catenin、cyclinD1为阴性表达;与M组比较,TM组、SFJB组wnt1、β-catenin、cyclinD1、HGF表达增高（P<0.01）。与M组比较,TM组、SFJB组Ki67阳性表达率明显增加,具有统计学意义（P<0.01）。结论:中等强度有氧运动对OJ小鼠引发的肝损伤有明显缓解作用,能不同程度促进肝细胞修复,其抗损伤作用与SFJB组作用相近。其作用机制与运动通过miR-34a介导激活Wnt信号通路发挥着关键性的作用有关。Wnt通路中的相关因子wnt1、β-catenin、和HGF在血浆中的表达水平作为一种无创的、简单易行的检测手段,为肝脏疾病的诊断及发生发展过程中标志物的筛选具有良好的应用价值。