【摘 要】
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原核表达系统生产rhBMP-2包涵体,通过稀释法对包涵体进行复性,并利用rhBMP-2的肝素结合域能与肝素特异结合的特点,亲和层析法纯化rhBMP-2.本研究使用rhBMP-2做诱导物,研究其
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原核表达系统生产rhBMP-2包涵体,通过稀释法对包涵体进行复性,并利用rhBMP-2的肝素结合域能与肝素特异结合的特点,亲和层析法纯化rhBMP-2.本研究使用rhBMP-2做诱导物,研究其对MCF-7细胞迁移力的影响。使用不同浓度的rhBMP-2分别诱导MCF-7细胞24 h后检测BMP-2信号激活情况和对MCF-7细胞迁移力的促进作用,发现30μg/ml的rhBMP-2具有最佳的诱导活性。为了探究rhBMP-2诱导MCF-7细胞迁移过程中涉及到的具体分子事件,本研究采用PCR array技术筛选肿瘤迁移相关基因,其中Rbl基因的下调最为明显,其次为CDH1(表达E-cadherin),此外,CD44的上调也非常明显。鉴于越来越多的研究表明CD44分子可能参与肿瘤的迁移过程,因此我们对上述基因蛋白水平,即Rbl, E-cadherin, CD44进行了进一步的Western Blot实验验证,结果和预期相一致。接着我们运用免疫组化法检测了不同肿瘤标本的BMP-2,Rbl,CD44和E-cadherin的表达情况,结果显示BMP-2与CD44的表达成正相关,而与E-cadheirn和Rb1的表达成负相关。提示BMP-2诱导肿瘤的在体迁移可能与Rbl和CD44有关。为了进一步研究Rbl在rhBMP-2促进乳腺癌细胞MCF-7迁移过程中的作用,我们用Rbl瞬时转染MCF-7,qRT-PCR结果显示转染Rbl后,Vimentin和CD44显著下调。综合前述结果,提示Rbl和CD44可能共同参与了rhBMP-2诱导的乳腺癌MCF-7细胞的迁移,该迁移过程的发生可能与EMT有关。
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