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双歧杆菌（Bifidobacterium）是人体肠道内重要的益生菌，它对维持人体肠道的健康起到很重要的作用。由于人体肠道内的双歧杆菌的数量随着人年龄的增加而逐渐减少，因此，适量补充双歧杆菌对人体是有益的。目前，市面上的双歧杆菌制剂主要以乳制品和保健品等为主，由于双歧杆菌是严格厌氧菌，在生产、运输和储藏过程中容易失活，造成制品的保质期短，疗效不明显。因此，如何提高双歧杆菌的耐氧能力并使其能够在制剂中稳定的存在，已经成为双歧杆菌研究的热点问题。 本文从健康学生的肠道中开展双歧杆菌的分离、筛选和鉴定工作，并对分离到的双歧杆菌进行耐氧驯化，为双歧杆菌的工业化应用奠定基础。主要的研究结果如下: (1)利用MRS培养基和改良的MRS培养基（MRS培养基中添加X-Gal0.06g/L、氯化锂3.0g/L、L-半胱氨酸盐酸盐0.5g/L）对55份健康学生的粪便进行双歧杆菌的分离、筛选，初步分离出25株双歧杆菌疑似菌株，经过生理生化试验发现其中有21株为双歧杆菌，然后结合它们的糖发酵试验结果和菌体形态，将这21株双歧杆菌分为六组，并分别选出一株代表性的菌株(B4、B13、B17、B21、B23、B24)利用Biolog自动微生物分析系统进行鉴定，菌株B4，B17，B23鉴定为乳双歧杆菌，B21为长双歧杆菌，而B13、B24未鉴定出。筛选的结果显示，和传统的MRS培养基相比，使用改良的MRS培养基能够有效提高筛选的准确性和效率。 (2)通过PCR方法对上述菌株进行进一步鉴定。以所筛选出的6株双歧杆菌基因为模板，利用PCR技术扩增出目的基因，将其连接到pMD18-T载体上，转化感受态细胞E.coil DH5α，提取质粒测序。测序结果表明菌株B4、B13、B17、B23与动物双歧杆菌乳亚种的同源性高达99％，菌株B21与长双歧杆菌的同源性达到98％，B24与两歧双歧杆菌的同源性也达98％，测序结果与生理生化试验和Biolog自动微生物分析系统的鉴定结果基本一致。 (3)利用凝乳试验对菌株B4、B13、B17、B21、B23、B24进行耐氧能力的测试，菌株B4的凝乳时间最短(23h)。利用不同高度的脱脂乳牛奶柱对菌株B4进行耐氧驯化，并对驯化前后双歧杆菌的生长特性进行比较。驯化后的B4能在有氧条件下生长，在PTYG液体培养基上培养8h后进入对数期，24h后进入稳定期，和驯化前的厌氧培养相比基本一致;且驯化后的B4菌株在稳定期的生长量(OD600为3.2)比驯化前的稍高（OD600为3.0）。 (4)对驯化后的B4进行生长条件的优化，结果表明:在常规有氧条件下，双歧杆菌B4在接种量为9％、温度为37℃、培养基起始pH值为8.0的PTYG培养基上生长良好，稳定期的OD600达到3.7，比优化前提高了17％。