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本研究以红细胞膜为材料,制备了一种安全性高、生物相容性好、能有效包被丹参酮IIA磺酸钠的纳米载药系统,并对其生物学特性进行了考察。主要研究内容和方法如下:1、建立STS-Nano-RBC HPLC分析方法。2、在10%×PBS(pH7.4)的低渗条件下使红细胞(RBC)内容物流失,再通过超声法使红细胞膜裂解为小囊泡,此时加入丹参酮IIA磺酸钠(STS)溶液,最后恢复等渗条件并通过聚碳酸酯膜挤出法制得包被STS的纳米红细胞微粒(STS-Nano-RBC)。以包封率为指标对制备温度、低渗条件、药物浓度、药物与红细胞膜的体积比等进行优化。采用透射电镜、动态光散射仪、高效液相色谱仪及凝胶电泳仪等对纳米红细胞膜载药体系的形态、粒径、电位、包封率及其所包含蛋白种类等进行表征。对STS-Nano-RBC的稳定性和安全性进行考察。3、通过透析法考察STS-Nano-RBC的体外释放情况。采用尾静脉注射法将STS-Nano-RBC注射入大鼠体内,考察其药动学行为及组织分布。4、采用荧光显微镜法和高效液相色谱法考察EA.hy926细胞对STS-Nano-RBC的摄取情况。通过选择不同的通道抑制剂和孵育条件对STS-Nano-RBC渗透入EA.hy926细胞的途径进行了初步考察。5、采用MTT法考察STS-Nano-RBC的细胞活性。构建细胞水平氧化应激模型,对STS-Nano-RBC的对氧化应激受损细胞的保护情况进行考察。实验结果显示:1、采用高效液相法建立STS-Nano-RBC体外分析方法,该方法灵敏性准确、回收率高。2、载药温度为4℃,低渗溶液为10%×PBS,STS为1.0 mg/ml,STS和红细胞膜的体积比为2:1条件下,STS-Nano-RBC具有最佳包封率。STS-Nano-RBC为粒径均一的球形颗粒,粒径为156±5.8 nm,电位-2.34±0.67mv,包封率为33.15±2.61%,所含蛋白种类与红细胞膜相比无明显减少。STS-Nano-RBC具有良好的稳定性和安全性。3、体外释放实验结果表明,STS注射液在6 h释放97%的药物,STS-Nano-RBC在6 h的释放量为44%,且在体外能缓慢释放至36 h。大鼠体内药动学实验结果表明,STS-Nano-RBC与相同剂量STS注射液在大鼠体内的半衰期(t1/2)分别为6.92 h和2.59 h,平均滞留时间分别为8.14 h和2.23 h,STS注射液组在给药后6 h达不到检测限,而STS-Nano-RBC在给药36 h后仍可监测到。4、荧光显微镜观察结果表明,将STS-Nano-RBC与EA.hy926细胞孵育6 h,STS-Nano-RBC可有效渗透入细胞;采用HPLC法对渗透入细胞的STS-Nano-RBC进行定量检测,结果表明,STS注射液组在孵育2 h时,药物渗透量达20.4%,24 h时渗透量为26.7%,STS-Nano-RBC在孵育2 h时,药物渗透量仅5.4%,24 h时渗透量为33.2%,表明与注射液组相比,STS-Nano-RBC可更有效的将药物转运入细胞内。对STS-Nano-RBC转运进入EA.hy926细胞的过程进行初步考察,结果表明过程不仅受温度、ATP、环境pH和渗透压的影响,同时受网格蛋白和小窝蛋白调控。5、细胞活性实验结果表明,Nano-RBC对EA.hy926细胞基本无毒,STS浓度低于100μg/ml时,细胞存活率高于75%,因此本实验选择10-150μg/ml作为考察两组制剂对氧化应激损伤细胞保护作用的浓度范围。采用750μmol/l的H2O2损伤EA.hy926细胞12 h,构建氧化应激损伤细胞模型,再以含不同浓度药物的STS-Nano-RBC和STS注射液干预,结果表明,在80-150μg/ml范围内STS-Nano-RBC与STS注射液组相比显示出更优越的氧化应激保护作用。根据以上实验内容,可以得出结论:STS-Nano-RBC制备过程简单、稳定性好、安全性高、可延长STS在大鼠体内的循环时间,增强STS在细胞水平逆转氧化应激损伤效果,纳米红细胞膜载体有望发展为有临床应用前景的纳米给药体系。