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嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）和迟钝爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）是多种水产动物的主要致病菌，还是引发食源性疾病的重要病原菌。研究表明，嗜水气单胞菌可引起人的急性胃肠炎、败血症及伤口感染、中耳炎、腹膜炎等。目前，在国外已将嗜水气单胞菌纳入腹泻病原菌的检测范围，是食品卫生检验的对象；迟钝爱德华氏菌是人鱼共患的条件致病菌。因此，嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌不仅对养殖生产是一种威胁，对人的健康也是一种潜在危险，检测水产动物及食品中嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌具有重要的实际意义。研究资料表明，嗜水气单胞菌的致病性与气溶素基因（aerA）、溶血素基因（hlyA）密切相关，这也是用于鉴别致病株与非致病株的关键因素；谷氨酸脱羧酶基因（gadB）是迟钝爱德华菌七个毒力基因（orfA、citC、fimA、gadB、katB、mukF和ssrB）之一，只存在于致病菌株中而不存在于非致病菌株中。本文在扩增上述毒力基因的基础上，建立了鉴定致病性嗜水气单胞菌的多重PCR方法和能同时检测致病性嗜水气单胞菌与迟钝爱德华氏菌的多重PCR方法，并用该方法及常规的微生物学方法对送检样品和水产养殖场水样进行了检测。试验Ⅰ根据GenBank中登录的相应基因序列设计并合成三对特异性引物，扩增嗜水气单胞菌aerA、hlyA基因和迟钝爱德华氏菌gadB基因，克隆后送交TaKaRa公司测序，与GcnBank中提交的相应核苷酸序列进行同源性比较。结果发现aerA、hlyA和gadB这三个基因与GenBank中提交的相应核苷酸序列都有较高的同源性，其中aerA基因的核苷酸序列与AF539467参考株的同源性最高，达到99．8％；hlyA基因的核苷酸序列与AF146599参考株的同源性最高，达到97．9％；gadB基因的核苷酸序列与AY078505参考株的同源性最高，达到87．1％．说明所设计的引物具有较高的特异性和可靠性，为建立多重PCR方法奠定了基础。试验Ⅱ根据试验Ⅰ设计的引物扩增aerA、hlyA基因，再辅以气单胞菌属所特有的内参照基因16s rRNA，进行多重PCR反应体系优化、多重PCR产物的测序鉴定与特异性和敏感性试验，试图建立一种检测致病性嗜水气单胞菌的多重PCR方法。对8株嗜水气单胞菌、16株相关菌株进行多重PCR检测，结果显示非致病性分离株均未扩增出毒力基因hlyA和aerA，而致病性分离株则至少含有hlyA基因；对40份送检的水产动物病料进行多重PCR检测，结果与常规微生物学检测符合率为97．5％。该方法具有较高的敏感性与特异性，可检测最低10 ng的模板。该试验建立的方法可快速检测水产动物及食品中的致病性嗜水气单胞菌。试验Ⅲ根据试验Ⅰ设计的引物扩增aerA、hlyA和gadB基因，进行多重PCR反应体系优化、特异性和敏感性试验，试图建立一种可同时用于嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌检测的多重PCR方法。对7株嗜水气单胞菌分离株和3株迟钝爱德华氏菌分离株进行多重PCR检测，结果显示非致病性分离株均未扩增出相关毒力基因，而致病性嗜水气单胞菌分离株则至少含有hlyA基因，致病性迟钝爱德华氏菌含有gadB基因；对40份送检的水产品样品及12份养鳗场取的样品进行多重PCR检测，结果与常规微生物学检测符合率分别为100％（爱德华氏菌）和98．1％（嗜水气单胞菌）。该方法具有较高的敏感性与特异性，最低可检测到10-9g（ng）级。该方法的建立对水产动物感染致病性嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌的快速诊断和分子流行病学的调查有重要意义。试验Ⅳ从福建省某养鳗厂的养殖池水体中分离出一株病原菌，该菌为革兰氏阴性短杆菌，运动力阳性，氧化酶阳性，产生吲哚，葡萄糖、半乳糖、蔗糖、甘露糖、阿拉伯糖、七叶灵、V-P阳性，根据菌落形态、生化特性及试验Ⅱ建立的多重PCR方法，最后鉴定为嗜水气单胞菌。致病性试验结果显示该分离菌具有较强的致病性，均能致死小白鼠和鳗鱼。药敏试验结果表明，该菌对卡那霉素、氯霉素和呋喃唑酮、氧氟沙星、环丙沙星等喹诺酮类药物极为敏感。试验Ⅴ进行了对喹诺酮类药物敏感的嗜水气单胞菌DNA旋转酶A亚单位（gyrA）基因的原核表达。喹诺酮类药物是通过影响gyrA所催化的DNA超螺旋反应过程中DNA裂解和重新组合步骤，从而阻断细菌DNA复制，达到抑菌和杀菌目的，当gyrA基因发生突变后往往意味着细菌对喹诺酮类药物抗性的产生。本试验根据GenBank中登录的gyrA基因序列设计引物，运用PCR扩增出与预期大小相符的基因片段。将此基因片段克隆至质粒pET30a（+）的EcoRI和XhoI位点，构建重组质粒，转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导获得高效表达，用Ni-NTA纯化目的蛋白，SDS-PAGE蛋白电泳表明在约28．0 kD处出现特异带，与理论推断值相符。经扫描定量分析，纯化后的融合蛋白纯度达到79．2％。gyrA基因蛋白的高效表达为其耐药性的分子机理研究奠定了基础。