大血藤、石楠和鸡血藤提取物原花青素的研究

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原花青素是黄烷-3-醇类化合物以不同方式缩合而成的多聚物,由植物类黄酮次生代谢途径合成,在植物界普遍散布。研究报道,原花青素具有广泛而强烈的生物活性,能够保护皮肤和生殖系统,改善免疫抑制等,被称为自然界最强的自由基清除剂。本研究针对大血藤、石楠和鸡血藤,使用超声波提取、有机溶剂连续萃取原花青素,使用香草醛-盐酸法和对-二甲氨基肉桂醛法对原花青素进行含量测定;使用大孔吸附树脂法纯化原花青素;继而评价其抗氧化活性;考察其对糖苷酶和胆碱酯酶的抑制活性;并使用紫外吸收光谱(Ultraviolet absorption spectrum,UV)、红外吸收光谱(Infrared absorption spectrum,IR)、反相高效液相色谱(Reverse phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)、基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)和核磁共振碳谱(13C nuclear magnetic resonance,13C-NMR)综合分析原花青素的结构。主要研究内容及结果如下:1、对大血藤(Sargentodoxae caulis)原花青素进行提取和纯化,采用香草醛-盐酸比色法测定各样品原花青素含量,评价其抗氧化活性和酶抑制活性。结果表明:大血藤粗提物、石油醚萃取物、乙酸乙酯与水两相不溶物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水相留余物中原花青素含量分别为(36.03±0.40)%、(1.19±0.11)%、(57.99±0.22)%、(32.40±0.07)%、(25.03±0.08)%和(41.32±0.37)%,经葡聚糖凝胶Sephadex LH-20纯化后,大血藤原花青素纯化物含原花青素(98.35±0.72)%,约为粗提物的2.73倍。大血藤原花青素纯化物对DPPH·清除活性(IC50=70.70±1.38μg/m L)是L-抗坏血酸(Vc)(IC50=78.89±1.67μg/mL)的1.12倍;抑制α-葡萄糖苷酶活性(IC50=4.37±0.17μg/m L)是阿卡波糖(IC50=527.51±19.97μg/m L)的120.71倍。说明大血藤提取物含有丰富的原花青素,并具有很强的体外抗氧化活性和酶抑制活性。2、为考察石楠提取物(Photinia serrulata)抗氧化活性与原花青素、多酚和黄酮含量之间的关系以及溶剂对抗氧化活性的影响,分别采用去离子水、85%甲醇、80%乙醇和70%丙酮对石楠枝-韧皮部、枝-木质部、老叶、幼叶、花序-轴、花序-小花、果序-轴和果序-果实进行超声提取,测定其原花青素、多酚和黄酮含量,评价其抗氧化活性。结果表明:石楠不同部位提取物抗氧化活性差异显著,枝-韧皮部和果序-轴提取物抗氧化活性最强;不同溶剂的提取效果差异极显著,枝-韧皮部提取物原花青素含量为(10.77±0.08)%29.31±0.69%;黄酮含量为(2.60±0.02)%7.02±0.01%;多酚含量为(3.15±0.02)%6.42±0.07%,其中85%甲醇提取原花青素效果最好,70%丙酮提取多酚和黄酮效果最好。相关性分析表明石楠提取物抗氧化活性与原花青素、多酚和黄酮含量呈现极显著正相关(P<0.01),说明石楠提取物原花青素、多酚和黄酮可能作为石楠抗氧化成分协同发挥抗氧化活性。3、采用大孔吸附树脂对鸡血藤(Spatholobi caulis)原花青素进行纯化,比较D101、X-5及AB-8树脂对鸡血藤原花青素静态吸附及解吸附能力,筛选出X-5型树脂用于纯化。对X-5型树脂的动态吸附及解吸附条件进行优化,获得最适条件:上样质量浓度为6.00 mg/mL时,上样流速2 BV/h,上样量10 BV,洗脱流速1 BV/h,洗脱剂用量2 BV。使用70%乙醇洗脱得到的纯化物(F70)中原花青素含量最高,为(97.53±0.27)%,是粗提物(48.81±0.34)%的2倍;对DPPH·清除活性(IC50=75.48±0.60μg/m L)是标准品L-抗坏血酸(Vc)(IC50=95.15±1.54μg/mL)的1.26倍;对α-葡萄糖苷酶抑制活性(IC50=4.79±0.06μg/mL)是标准品阿卡波糖(IC50=515.23±17.35μg/m L)的107.56倍。说明鸡血藤提取物原花青素含量丰富,具有很强的抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性。4、利用紫外吸收光谱、红外吸收光谱、RP-HPLC、MALDI-TOF MS和13C-NMR对鸡血藤原花青素进行结构分析,结果表明鸡血藤原花青素主要由原花青定和原翠雀定构成,末端单元以儿茶素为主,延伸单元以表儿茶素为主。利用MALDI-TOF MS检测到聚合度分布为三聚体至十五聚体,内部存在没食子酰基化。
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