禽网状内皮组织增殖病(Reticuloendotheliosis，RE)是由禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)引起的鸡、火鸡、鸭、鹤鹑和鹅等以淋巴网状细胞增生为特征的肿瘤性疾病。尽管REV本身对禽的致死作用并不很明显，但由于REV能使法氏囊萎缩，其致病基因V-rel能引起B淋巴细胞转化为肿瘤细胞，侵损禽机体免疫系统，使机体抵抗力下降，从而导致其它疾病的并发感染，造成高淘汰率和高死亡率。因此，建立能普查REV的方法十分必要。　　 本研究采用分子生物学方法，在对REV的env基因克隆、原核表达的基础上，以纯化的GST-env囊膜蛋白为包被抗原，替代REV全病毒，建立了检测REV抗体的间接ELISA方法（ienv-ELISA），并组装成试剂盒。用该ienv-ELISA诊断试剂盒与进口的全病毒ELISA（iREV-ELISA）诊断试剂盒进行对比，探讨了准确率。从而为我国养禽业提供了特异、灵敏、安全、快速、价廉的国产REV抗体检测试剂盒。首先以IPTG诱导PGEX-4T-3-env/BL21基因工程菌，进行原核表达，并用SDS-PAGE检测，与空白破碎菌体对照结果显示破碎菌体蛋白在69.38KD处出现1条明显的特异性条带，表明env基因在大肠杆菌中以包涵体的形式进行了高效表达。将PGEX-4T-3-env/BL21基因工程菌以IPTG进行大量诱导，使其表达env囊膜蛋白，然后在冰浴条件下超声波破碎，用8mol/L尿素溶解液洗涤并溶解包涵体蛋白,4℃尿素梯度复性后用GST融合蛋白纯化试剂盒纯化，经测定纯化目的蛋白待测样品中GST-env囊膜蛋白的含量为391.98μg/mL。将纯化得到的GST-env囊膜蛋白进行Western blot检测分析，结果表明，该GST-env囊膜蛋白具有良好的抗原性和反应原性，能够很好地识别REV抗体。以纯化的GST-env囊膜蛋白为包被抗原，建立了检测REV抗体的间接ELISA（ienv-ELISA）方法。对ienv-ELISA工作条件优化进行优化，结果表明，最佳抗原包被液为CB；最佳封闭液浓度为1％ BSA-PBST；最佳抗原包被量为8μg/mL；血清最佳稀释度为1:300；血清最佳作用时间为1 h；二抗的最佳稀释度为1:5000；二抗最佳作用时间为1 h；底物最佳显色时间为25 min。重复性试验、特异性试验、对比试验和保存期实验结果显示，建立的ienv-ELISA方法有良好的可重复性，标准差均小于15％；与鸡MDV、ALV、NDV、H5N1、H9N1等病毒阳性抗体均无交叉反应；与REV抗体检测试剂盒（iREV-ELISA）对比，所建立的ienv-ELISA诊断敏感性、诊断特异性以及准确率分别为90.625％、93.75％和92.7％，表明该方法具有良好的重复性、反应特异性、诊断敏感性、诊断特异性、准确率和耐储存性。用组装的试剂盒对采集自山东部分地区养殖场的鸡群的235份血清进行了REV抗体的检测，结果发现其中阳性血清77份，阴性血清158份，阳性率为32.77％，与iREV-ELISA对比，准确率为90.2％。