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大量研究表明,NO作为一信号分子在调控植物生长发育、应对生物和非生物逆境胁迫中起着重要作用。植物生长的自然环境中机械刺激现象非常普遍,如风吹、雨打、触动、机械损伤、压力及病虫害的侵入等。因此探求机械刺激下植物体内NO的变化、产生途径及其作用机理具有重要理论价值。本实验用烟草悬浮细胞为材料,通过提高细胞振荡培养箱的转速作为机械刺激因子,对机械刺激条件下烟草悬浮细胞NO的变化、产生途径及其调控机制作了初步探索。
实验结果表明,机械刺激诱导烟草悬浮细胞NO的快速产生,细胞中NO含量与机械刺激强度呈正相关。机械刺激处理30分钟,细胞中NO含量达到最高值,这种NO的快速产生能被NO的专一清除剂cPTIO所逆转。用一氧化氮合酶(NOS)抑制剂NG-甲基-L-精氨酸(L-NMMA)和硝酸还原酶(NR)抑制剂叠氮钠(NaN3)预处理,发现L-NMMA能抑制细胞中由机械刺激诱导产生的NO总量的近90.0%,而NaN3对细胞的NO产生量几乎无影响,结合NOS的活性变化,可以推断NOS在机械刺激诱导烟草悬浮细胞产生NO的过程中起主要作用。实验还表明Ca2+-CaM也参与了NO产生的调控。Ca2+螯合剂EGTA,胞质Ca2+通道阻断剂La3+和胞内Ca2+通道拮抗剂钌红(RR),CaM抑制剂CPZ和TFP都不同程度地减少NO产生。这些结果表明Ca2+-CaM参与了机械刺激诱导的烟草悬浮细胞中NO的产生。