机械刺激诱导烟草悬浮细胞NO生成的途径及其与Ca/CaM的相关性

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大量研究表明,NO作为一信号分子在调控植物生长发育、应对生物和非生物逆境胁迫中起着重要作用。植物生长的自然环境中机械刺激现象非常普遍,如风吹、雨打、触动、机械损伤、压力及病虫害的侵入等。因此探求机械刺激下植物体内NO的变化、产生途径及其作用机理具有重要理论价值。本实验用烟草悬浮细胞为材料,通过提高细胞振荡培养箱的转速作为机械刺激因子,对机械刺激条件下烟草悬浮细胞NO的变化、产生途径及其调控机制作了初步探索。 实验结果表明,机械刺激诱导烟草悬浮细胞NO的快速产生,细胞中NO含量与机械刺激强度呈正相关。机械刺激处理30分钟,细胞中NO含量达到最高值,这种NO的快速产生能被NO的专一清除剂cPTIO所逆转。用一氧化氮合酶(NOS)抑制剂NG-甲基-L-精氨酸(L-NMMA)和硝酸还原酶(NR)抑制剂叠氮钠(NaN3)预处理,发现L-NMMA能抑制细胞中由机械刺激诱导产生的NO总量的近90.0%,而NaN3对细胞的NO产生量几乎无影响,结合NOS的活性变化,可以推断NOS在机械刺激诱导烟草悬浮细胞产生NO的过程中起主要作用。实验还表明Ca2+-CaM也参与了NO产生的调控。Ca2+螯合剂EGTA,胞质Ca2+通道阻断剂La3+和胞内Ca2+通道拮抗剂钌红(RR),CaM抑制剂CPZ和TFP都不同程度地减少NO产生。这些结果表明Ca2+-CaM参与了机械刺激诱导的烟草悬浮细胞中NO的产生。
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文以诱导表达细胞质CaM/CaMBP两个转基因烟草细胞为试验材料,研究了在机械刺激条件下烟草细胞程序性细胞死亡发生过程以及在这一过程中H2O2和Ca2+-CaM所起的作用。实验内容分为三部分:第一部分测定了在不同机械刺激条件下(130、150、180和200rpm)烟草细胞程序性死亡(PCD)的发生过程,主要是通过显微镜的形态学观察和琼脂糖凝胶电泳验证这个过程,并且证明了在机械刺激条件下氧化爆发的
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