论文部分内容阅读
目的：检定紫花牡荆素(casticin, CAS)是否抑制人肺腺癌A549细胞增殖活性和诱导细胞凋亡作用；并探讨其作用机制是否涉及活性氧(reactive oxygen species, ROS)生成以及线粒体信号传导途径。 方法：用不同浓度 CAS处理的体外培养 A549细胞，溴化四甲基偶氮唑蓝(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoli-um bromide, MTT)法测定增殖活性；膜联蛋白Ⅴ(annexinⅤ)/碘化丙啶(propidium iodide, PI)双染色以流式细胞术(flow cytometry, FCM)分析细胞凋亡率；2,7-二氢二氯荧光素乙二脂(2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate, H2DCFH-DA)探针以FCM分析细胞ROS生成；四氯四乙基苯并咪唑基羰花青碘化物(5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetrethyl benzimidalyl carbocyanine iodide, JC-1)探针以 FCM分析线粒体跨膜电位；Western Blotting分析 Bax蛋白表达和细胞色素C(cytochrome-c, Cyt-C)释放。 结果：MTT法测定结果表明：CAS能抑制A549细胞增殖，呈浓度依赖性和时间依赖性。AnnexinⅤ/PI双染色FCM分析结果表明：CAS能促进A549细胞凋亡，N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)有抑制CAS诱导A549细胞凋亡的作用。H2DCFH-DA探针FCM分析结果表明：CAS能增加A549细胞ROS生成水平，NAC具有有效对抗CAS增加ROS生成的作用。JC-1探针FCM分析结果表明：CAS能降低A549细胞的线粒体跨膜电位，NAC具有减弱CAS降低线粒体膜电位的作用。Western Blotting分析结果表明：CAS能促进A549细胞Bax蛋白表达和Cyt-C释放，NAC具有拮抗CAS上调Bax蛋白表达和促进Cyt-C释放的作用。 结论： 1. CAS具有抑制A549细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。 2. CAS诱导A549细胞凋亡的作用机制可能与ROS生成及线粒体信号传导途径有关。