酶法制备新琼寡糖及其功能活性的研究

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本文利用产琼胶酶的菌株-类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)WL-15制备β-琼胶酶,用该酶降解琼胶制备新琼寡糖,并对所制备的新琼寡糖的功能活性进行了研究。在对新琼寡糖的抗氧化性研究中,以DPPH·的甲醇溶液为反应体系,研究酶解时间、酶解反应温度及新琼寡糖的浓度对其体外清除DPPH·的影响。利用苯酚硫酸法和DNS法计算各条件下所制备的新琼寡糖的平均聚合度,并对其进行TLC分析。结果显示,新琼寡糖具有体外清除DPPH·的能力,且随着其浓度的增加而有所增强。不同酶解条件下所制备的新琼寡糖对DPPH·的清除能力不同,其中酶解0.5h、酶解反应温度为45℃时效果最佳,清除率可达89%,IC50值为0.2 mg/mL左右。TLC分析结果表明,各酶解条件所制备的新琼寡糖系列均是由不同聚合度的新琼寡糖组成的混和寡糖,其中清除率最好的新琼寡糖系列,其平均聚合度为5.51。以保加利亚乳杆菌(LactobacillusbμLgaricus)为实验对象,对上述方法制备的新琼寡糖的进行体外益生元效应的研究。结果表明,酶法制备的新琼寡糖对保加利亚乳杆菌的生长有一定的促进作用。不同酶解时间制备的混合新琼寡糖,其体外益生元效果也略有不同,其中,酶解1.5 h所制备的混合新琼寡糖对该菌的促生长能力最强,相较于葡萄糖,其使该菌达到最大生长量的时间从24 h缩短为12 h左右,生长速率提高近一倍,最大生长量也提高了 40%左右。体外消化实验表明,唾液淀粉酶对该新琼寡糖没有消化作用;抑菌活性实验表明,该混合新琼寡糖对保加利亚乳杆菌的最小抑菌浓度大于10%,说明其对保加利亚乳杆菌的生长无抑制作用。本文最后研究了新琼寡糖对唾液淀粉酶活性的影响。研究包括新琼寡糖对唾液淀粉酶的酶活、pH稳定性、高温耐受性的影响,以及与唾液淀粉酶的激活剂—Cl-之间的协同作用。结果显示,浓度为100μg/mL的新琼寡糖,可使唾液淀粉酶的酶活提高1.21倍;于55℃保温2 h,新琼寡糖中的唾液淀粉酶仍保持较好的活性,而对照组的酶活在保温1 h时就几乎完全丧失;新琼寡糖中的唾液淀粉酶有更好的pH稳定性,其在pH 6~8范围内的酶活均能维持28 U/mL左右,而对照组在pH 6~8范围内酶活下降了 38%;新琼寡糖与Cl-可以协同增强唾液淀粉酶的酶活,使酶活提高1.98倍。因此,新琼寡糖可作为唾液淀粉酶活性激活剂和稳定剂,可能对胃肠道的保健及消化不良类疾病的治疗有一定的意义。
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