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目的：利用卵巢切除术联合孤养加慢性不可预见性温和刺激(CUMS)制作更年期抑郁症大鼠模型,观察大鼠模型血清雌二醇(E_2)水平、海马5-羟色胺(5-HT)含量、脑干中缝核是否有雌激素受体β(ERβ)表达,以及ERβ和色氨酸羟化酶2(TPH2)表达的变化,加深对更年期抑郁症脑功能变化机制的认识；并在中医理论指导下,研究补益肝肾中药对更年期抑郁症大鼠模型的防治效果及它对上述指标的影响,探讨补益肝肾中药的作用机制,为传统中医药防治更年期抑郁症的理论及临床应用提供理论依据,进一步促进中医在抑郁症临床防治中的应用。
方法：
1.利用卵巢切除术联合孤养加CUMS制备更年期抑郁症大鼠模型,以子宫重量和子宫形态学、动情周期以及行为学测试进行评价。
2.子宫形态学观察采用HE染色法；大鼠动情周期情况采用阴道细胞学涂片法；行为学测试以敞箱(Open-Field)试验、糖水消耗试验以及Morris水迷宫进行测试。
3.以放射免疫分析法(RIA)测定血清E_2水平、高效液相色谱-电化学检测法(HPLC-ECD)测定海马5-HT含量、RT-PCR技术检测中缝核ERβmRNA和TPH2 mRNA表达以及免疫荧光组化双重染色法检测中缝核ERβ蛋白和TPH2蛋白表达。
结果：
1.大鼠卵巢切除后,连续5天阴道细胞涂片未见动情周期变化；子宫明显萎缩,重量明显减轻,HE染色示子宫内膜腺体减少,内膜及肌层明显变薄。
2.给予大鼠孤养和CUMS,应激组大鼠与模型组大鼠出现行为学方面的变化：直立活动得分和水平活动得分均减少；糖水消耗百分比减少；学习记忆能力下降。与应激组大鼠相比,模型组大鼠上述活动下降得尤为明显。
3.应激组大鼠与模型组大鼠血清雌二醇(E_2)水平紊乱(下降或升高)、海马5-HT含量减少、中缝核ERβmRNA和TPH2 mRNA相对表达量下降及ERβ阳性细胞数和TPH2阳性细胞数明显减少。而且,模型组大鼠海马5-HT含量比应激组大鼠更低。
4.免疫荧光组化双重染色法示:NeuN和TPH2有很好的共存关系；RT-PCR及免疫荧光组化双重染色法示：中缝核确有ERβ的表达,并与TPH2有良好的共存关系。
5.在补益肝肾中药作用下,大鼠子宫重量及子宫指数有所增加；行为学测试方面：水平活动得分和直立活动得分均有所上升；糖水消耗百分比升高；学习记忆能力有所增强。
6.与模型组大鼠相比,中药组大鼠血清E2水平下降、海马5-HT含量增加、中缝核ERβmRNA和TPH2 mRNA相对表达量增加、ERβ阳性细胞数和TPH2阳性细胞数明显增多。
结论：
1.采用孤养加CUMS能成功制备抑郁症大鼠模型；在卵巢切除术的基础上联合孤养加CUMS能成功制备更年期抑郁症大鼠模型。
2.更年期更易发生抑郁症。
3.补益肝肾中药更年期抑郁症大鼠模型具有改善作用。补益肝肾是中医药防治更年期抑郁症的主要治则。
4.TPH2所在的神经元几乎都为5-羟色胺能神经元,且大鼠中缝核5-羟色胺能神经元上确有ERβ的表达。
5.调节血清E2水平、提高大鼠中缝核ERβ和TPH2的表达,促进5-HT的合成,使海马5-HT含量升高,可能是补益肝肾中药防治更年期抑郁症的作用途径之一。