一株高致病性禽流感病毒的分离鉴定及分子生物学特性初步研究

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高致病性禽流感是由H5N1亚型禽流感病毒(Avian Influenzavirus,AIV)所引起的禽类及哺乳动物的一类急性传染病,近年来在我国和世界各地频繁暴发,给世界养殖业和人类健康造成极大威胁。本试验对临床疑似发病死亡鸡进行了AIV分离、鉴定和序列测定,为进一步研究禽流感病毒的进化机制和变异规律提供试验依据。 从华北某发病鸡场的病死鸡内脏中分离到一株AIV,经鉴定为HSN1亚型AIV,鸡胚半数致死量(ELD<,50.)为10<-8.31>/0.2ml,静脉接种致病指数(IVPI)为3.0,根据欧盟国家鉴定禽流感病毒毒力的标准,判定该分离株为高致病性禽流感病毒。 采用RT-PCR的方法扩增出该流感病毒株的8个基因片段的全序列,序列分析发现HA蛋白切割位点处的连接肽序列为-QGEGGRRRKKR↓GLF-,有6个碱性氨基酸插入,符合高致病性禽流感病毒(HPAIV)的特征,而且在6个碱性氨基酸的前面有2个甘氨酸(GG)的插入,使该毒株有毒力增强趋势。受体结合位点序列保守,226位点氨基酸为Q,228位点为G,具有禽源毒株的典型特征。 与分离于1996~2006年的代表性毒株进行序列分析表明,该毒株的HA基因与毒株CKHB3262005的亲缘关系最近,基因同源性最高,为98.5%。
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