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第一部分: 背景及目的:挤压伤综合征是地震、坍塌等灾害后常见的伤情,急性肾损伤是其主要表现之一,严重影响患者预后。液体复苏是预防和治疗急性肾损伤的关键环节,但选择哪一种液体(晶体-胶体)才是更合适的救治方案目前尚存在争论。血管内皮损伤是挤压伤后多脏器功能损伤的重要因素,新一代羟乙基淀粉能够减轻内皮损伤且肾脏副作用较小。本研究目的是比较6%HES130/0.4联合生理盐水与单纯应用生理盐水治疗挤压综合征的效果,并探讨两种治疗方案对氧化应激和内皮损伤的作用。 方法:使用解放军总医院肾脏疾病国家重点实验室构建的挤压装置建立严重挤压伤兔模型。研究分实验组与生存率观察组。实验组24只新西兰兔随机分四组,每组6只:Sham组,单纯捆绑:余三组均接受36倍体重6小时双下肢挤压,分为:Model组,单纯挤压;SAL组,0.9%生理盐水;SAL/HES组,0.9%生理盐水+6%HES130/0.4组。液体复苏在挤压结束前60分钟至再灌注24小时期间进行,维持平均动脉压(MAP)65mmHg,复苏期间给予所有动物维持生理需要量的生理盐水(1ml/kg.h)。检测挤压前,解压前10分钟,再灌注3小时、6小时、12小时及24小时血清生化指标,尿液NGAL与KIM-1水平。再灌注24小时血清IL-6,IL-10,sTM和ESM-1,肾脏和肺脏MDA,GSSH/GSH比率及TAC活性。生存率观察组48只新西兰兔随机分成四组(同实验组):n=12只/组;观察至再灌注72小时的生存情况。 结果:Model组观察结束时,与Sham组同时间点比较,血清CK、AST、ALT及K+水平升高,Ca2+水平降低,Cr及BUN水平增高,差异显著(p<0.05);尿液NGAL及KIM-1浓度显著升高(p<0.05)。分别应用6%HES130/0.4联合0.9%生理盐水(约1:2比列)及单纯0.9%生理盐水补液观察,实验组:SAL/HES组与SAL组观察结束时,血清CK,AST及LDH水平与Model组无显著差异(p>0.05);血清K+、Cr及BUN水平降低,差异显著(p<0.05);尿液KIM-1较Model组降低(p<0.05);SAL/HES组尿液NGAL水平较Model组降低(p<0.05)。与Model组比较,SAL/HES组肾脏及肺脏MDA含量及GSSH/GSH比率降低,TAC水平恢复;血清IL-6,IL-10及sTM水平降低(p<0.05)。SAL/HES组72小时生存率(4/12)高于SAL组(1/12),差异显著(p<0.05)。 结论:6%HES130/0.4联合生理盐水补液和单纯应用生理盐水补液均能预防挤压伤后急性肾损伤的发生;尿液NGAL检测是较血清Cr及尿液KIM-1更早的预警挤压伤相关急性肾损伤的指标;6%HES130/0.4联合生理盐水补液较单纯生理盐水补液改善生存率更有优势,与氧化损伤、炎症反应及系统内皮损伤改善相关。 第二部分: 背景与目的:抗癌药物顺铂(cisplatin,CP)引发的急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)主要机制之一是肾小管上皮细胞的凋亡。促红细胞生成素(erythopoietin,EPO)对肾小管上皮细胞的保护作用通过EPO抗凋亡机制介导。然而,EPO保护作用的具体分子机制尚不清楚。我们观察了重组EPO(recombinant human erythropoietin,rHuEPO)保护顺铂诱导AKI潜在的分子机制。 方法:64只Sprague-Dawley(SD)R随机分四组,每组16只:控制组(Control组):0.9%氯化钠注射液(5mL/kg),腹腔注射;模型组(CP组):顺铂(10mg/kg,0.9%氯化钠注射液2mg/mL溶解),腹腔注射;rHuEPO组(CP+rHuEPO组):顺铂注射前48小时,15分钟及后48小时给予rHuEP05000U/kg联合LY294002空载体(DMSO,33.3μL/kg),尾静脉注射;PI3K抑制剂(LY294002)组(CP+rHuEPO+LY组):于rHuEPO注射前10分钟给予LY294002(0.3mg/kg)。检测。肾脏功能指标和观察肾组织病理,TUNEL染色检测细胞凋亡,Western blot方法检测EPOR、cleaved caspase-3、GRP-78、caspase-12及CHOP等内质网应激与P13K/Akt通路相关蛋白表达;免疫组化法观察上述蛋白组织切片上的表达情况。 结果:SD鼠经腹腔注射顺铂96h后,血肌酐及尿素氮水平明显增高。病理组织学示:近端肾小管上皮细胞发生空泡变性,近端小管扩张及蛋白质管型出现,刷状缘脱落。肾小管上皮细胞经TUNEL染色后观察到阳性率明显增加。应用Western blot及免疫组化法对EPOR、cleaved caspase-3、GRP-78、caspase-12、CHOP、P13K及P-Akt蛋白表达观察发现:CP组EPOR、cleaved caspase-3、GRP-78、caspase-12、CHOP水平明显增高;P-Akt表达明显下调与Control组比较。rHuEPO组血清肌酐和尿素氮水平明显降低,肾脏组织学病理仅见少量蛋白管型和空泡变性;抑制了EPOR、cleaved caspase-3、GRP-78、caspase-12、CHOP蛋白表达上调及恢复了p-Akt水平,同CP组比较;P13K阻断剂部分抑制了rHuEPO的作用。 结论:rHuEPO通过活化PI3K/Akt通路同时抑制了内质网应激引起的凋亡保护了顺铂导致的AKI。