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目的:本课题旨在研究异硫氰酸苯乙酯（phenylhexyl isothiocyanate，PHI）单独及联合阿霉素（Adriamycin，ADM）对人慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞株K562及其耐药细胞株K562/A02作用及其机制，同时研究PHI对K562/A02细胞ADM耐药性与敏感性的影响，为PHI的进一步研究及临床应用提供理论依据。
方法:（1）采用甲基四唑蓝法（MTT）法检测PHI、PHI+ADM和ADM分别作用于K562/A02细胞和K562细胞24、48和72h对细胞的增殖影响，计算出其半数抑制量（50％Inhibiting Concentration， IC50）、逆转倍数（Fold Reversal，FR）；（2）采用流式细胞仪（Flow Cytometry， FCM）检测不同浓度PHI对K562细胞和K562/A02细胞的周期和凋亡，以及PHI与1μg/ml ADM联合运用时细胞内ADM浓度的变化；（3）分光光度仪（Spectrometric enzyme assay）测定PHI作用前后细胞内还原性谷胱甘肽（GSH）含量的变化；（4）采用FCM检测PHI单药作用前后P糖蛋白1（P-gp1）和多药耐药性相关蛋白1（MRP1）的变化；（5）采用半定量PCR（RT-PCR）测定细胞P-gp1、MRP1 mRNA表达变化。
结果:（1）PHI对K562、K562/A02细胞的作用有浓度和时间依赖性。其中，PHI48h作用K562/A02、K562的IC50分别为（64.3±3.83）μmol/l和（63.5±3.93）μmol/l，两者间无显著差异（p>0.05）； ADM作用48h对K562/A02、K562细胞的IC50值分别为（57.43±4.55）μg/ml和（1.16±0.05）μg/ml，K562/A02对ADM的耐药倍数为49.51倍；PHI+ADM合用组，PHI≥10μmol/l时，ADM对两组细胞的IC50均下降（p<0.05），当PHI≥20μmol/l其耐药FR变化差异显著（p<0.05）。（2）FCM检测显示①当0μmol/l PH1作用于K562/A02细胞G1期占（30.65±0.92）％，40μmol/l时G1期占（47.49±0.93）％，随着PHI的浓度增加K562/A02细胞周期G1期比例增加。②对照组K562/A02细胞48h凋亡率为（1.83±0.35）％；1μg/ml的ADM单独作用于K562/A02细胞凋亡率为（1.87±0.39）％，ADM与PHI联合使用后K562/A02细胞的凋亡随着PHI浓度的增加而增加。③1μg/ml ADM作用K562/A02细胞48h，细胞内ADM平均荧光强度为（87.00±4.64），当加入≥20μmol/lPHI的浓度时，K562/A02细胞内ADM药物浓度增加有显著差异（P<0.05）。（3）分光光度仪检测发现：K562/A02细胞与K562细胞中GSH的浓度之比为1.8，显示耐药株肿瘤细胞内较高的GSH浓度。单独运用1μg/ml ADM作用48h K562/A02细胞内的GSH含量下降5％；单独PHI作用48h K562/A02细胞内的GSH含量随着PHI浓度的增加先是轻度升高后下降，GSH含量下降点在PHI为10μmol/l时；当PHI≥20μmol/l与1μg/mlADM联合运用48h时，K562/A02细胞内的GSH含量随着PHI浓度的升高进行性下降。（4）FCM测定K562/A02细胞膜P-gp1的值为（98.28±1.71）％，K562细胞P-gp1为（0.60±0.21）％，两者有明显差异（P<0.05）。加入不同浓度的PHI作用48h，当PHI≥40μmol/l时，K562/A02细胞膜P-gp1表达下降出现差异（P<0.05）。K562/A02细胞、K562细胞MRP1分别为（98.81±1.72）％和（98.43±1.71）％，两者无明显差异（P>0.05）。（5）RT-PCR检测显示K562细胞MDR1 mRNA表达为阴性，K562/A02细胞MDR1 mRNA表达为阳性；相应的MDR1/β-action灰度值下降亦在PHI≥40μmol/l时出现差异（P<0.05）；两细胞株之间的MRP1 mRNA无差异（p>0.05），而不同浓度PHI作用于K562/A02细胞MRP1 mRNA变化亦无差异（p>0.05）。
结论:（1）PHI对K562/A02细胞有时间、剂量依赖性的细胞毒作用，其作用与细胞内GSH耗竭无线性关系。（2）联合使用PHI可减少ADM的用量，而降低其毒副作用。（3）PHI不但可以增强K562/A02细胞对ADM的敏感性，而且具有一定的耐药逆转作用。（4）PHI逆转K562/A02细胞耐药作用可能是由多种机制共同介导的，其中与降低细胞内GSH、下调P-gp1有关。