论文部分内容阅读
研究背景:已知全部脑卒中的80％是缺血性脑卒中。现有研究表明，抗血小板聚集药物是有效降低缺血性脑卒中(Ischemic Stroke，IS)再次发生风险的药物之一，并由此减少缺血性脑卒中患者的复发率以及致残率。氯吡格雷（clopidogrel）是目前在缺血性脑卒中中被广泛应用于其二级预防的一种针对性药物。近年来的研究发现，即使在持续进行氯吡格雷要求剂量服用的患者中，仍有部分患者无法有效抑制二膦酸腺苷(adenosine diphosphate，ADP)导致的血小板聚集以及活化，进而缺血事件再发率升高，这可能与药物疗效的个体差异有关。发生的这种现象被定义成氯吡格雷抵抗(clopidogrel resistance，CR)，其发生比例约为11％-44％。目前，对于药物抵抗的评估，国际多采用的标准为用药前后血小板聚集率的差值是否超过10％。氯吡格雷从进入患者体内到发挥抗血小板聚集的作用，需要多个步骤来转化为有活性的代谢产物，更需要多基因的参与。其中ABCB1(ATP binding cassette transporterfamily)是一个较重要的影响氯吡格雷在肠道内吸收代谢的基因。本文选取ABCB1基因的常见多态性位点rs1045642，探讨其与中国北方汉族IS人群发生氯吡格雷抵抗的关系。 目的:本研究即将在中国北方汉族缺血性脑卒中人群中进行，进一步探讨ABCB1 rs1045642基因多态性与氯吡格雷药物抵抗之间可能存在的关系，从而在患者的抗血小板药物个体化治疗方案选择中提供理论依据。 研究方法:本研究选取110例急性缺血性脑卒中患者作为研究对象，患者均为在中国医科大学附属第一医院神经内科病房进行住院治疗。所有研究对象均在入院后口服氯吡格雷75mg/日，于首日清晨空腹时采集外周静脉血5ml，EDTA抗凝，用于提取基因组DNA。于首日给药前及服用药物7天时分别采集静脉血2ml，3.2％枸橼酸钠抗凝，用于测定血小板聚集率。本研究将CR定义为在5μmol/L ADP诱导下的最大血小板聚集率(maximum platelet aggregation rate，MPAR)在氯吡格雷服用前和服用7d后变化值不超过10％。所有患者根据相关检测结果，被分别定为CR组和非CR(NCR)组。提取基因组DNA后用PCR扩增目的基因并用RFLP法测定SNP，并选取部分样本对基因分型进行测序认定。对实验所得结果进行统计学分析，以P＜0.05有统计学意义。 结果:ABCB1基因的单核苷酸多态rs1045642(C3435T)位点在CR组和NCR组均存在CC、CT、TT三种基因型，基因型频率分别为20.0％、45.7％、34.3％和41.3％、49.3％、9.4％。同时，在不同的三种遗传模式（即隐性、共显性、显性）下，CR组中，TT基因型频率相比NCR组明显较高，P值分别为0.001、0.003、0.028。相比于携带ABCB1基因C等位基因，ABCB1基因单核苷酸多态位点rs1045642携带T等位基因频率在CR组明显高于NCR组（57.1％ vs34％，P值为0.001）。从上面结果可以看出，ABCB1基因在rs1045642位点的等位基因频率以及基因型频率在CR组和NCR组之间均存在着显著差异，P值均＜0.05。 结论:北方汉族缺血性脑卒中患者中，ABCB1基因在SNP位点rs1045642(C3435T)的多态性可能是CR发生的一个独立的危险因素，T等位基因可能是CR发生的风险基因。