腹泻性贝毒软海锦酸快速免疫检测技术研究

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腹泻性贝毒(Diarrlletic shellfish Poisoning,DSP)是由有毒赤潮藻鳍藻属和原甲藻属产生的一类脂溶性多环醚类生物活性物质,主要成分是软海绵酸(Okadaic Acid,OA)及其衍生物。腹泻性贝毒可在贝类等滤食性动物体内富集,因而危害食用者健康。近年来关于腹泻性贝毒的事件在我国均有报道。腹泻性贝毒的主要检测分析方法有生物毒性法、液相色谱法以及免疫化学法。本研究采用碳二亚胺方法合成了软海绵酸与蛋白载体的偶联物,分别用作免疫抗原和包被抗原。通过免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术,制备了抗软海绵酸的单克隆抗体,建立了软海绵酸的间接竞争酶联免疫检测技术和胶体金标记免疫层析检测技术。结果表明:用抗OA单克隆抗体建立的间接竞争酶联免疫检测方法,最低检出限为0.45ng/ml,灵敏度为2.59ng/ml,平均回收率为92.04%,平均变异系数为3.52%。用抗OA单克隆抗体建立的胶体金标记免疫层析快速检测方法,检测时间为3-5min,检出限为25ng/ml。本研究建立的酶联免疫检测方法和胶体金标记免疫层析检测方法完全可以满足国家规定的检测贝类中软海绵酸20μg/100g贝肉的安全阈值,也为我国有毒赤潮腹泻性贝毒的监测与食品安全检验提供了技术基础和快速检测产品。
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