论文部分内容阅读
[目的]:①研究砒霜(As2O3)纳米粒的制备工艺及表征;②研究As2O3纳米粒子体外对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并与传统的剂型亚砷酸(As2O3注射液)进行比较;③研究As2O3纳米粒体外诱导凋亡的分子机制。
[材料方法]:①采用溶胶-凝胶法制备As2O3纳米粒,用透射电镜(transmissionelectronmicroscope,TEM)、扫描电镜(scanningelectronmicroscope,SEM)、能谱仪(energydispersivespectrometer,EDS)、图像分析系统(ComputercolormagicimageanalysissystemCMIAS)进行表征及特性检测。②采用MTT法研究As2O3纳米粒子体外对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用;光镜和电镜观察As2O3纳米粒处理细胞后的形态学改变,并与传统的剂型亚砷酸(As2O3注射液)进行比较;流式细胞仪测定As2O3纳米粒子及亚砷酸诱导细胞的凋亡率。③免疫组织化学法、RT-PCR方法检测As2O3纳米粒子及亚砷酸处理细胞后Bcl-2和Bax基因的表达改变。
[结果]:①自行研制的As2O3纳米粒子近圆形或椭圆形,电子密度高,分散性好,直径分别为80nm和40nm两种。其经能谱仪检测证实为As2O3,图像分析系统对As2O3纳米粒子的粒径进行统计学测试,结果示其平均粒径为80nm±0.01和40nm±0.01;②体外细胞培养实验发现,亚砷酸和As2O3纳米粒均可对人肝癌细胞产生明显的生长抑制作用,并诱导癌细胞凋亡。在相同的As2O3浓度及培养条件下,As2O3纳米粒显示山比亚砷酸有更为明显的细胞毒作用,尤其在高浓度情况下(5、10μmol/L)更为明显(P<0.05)。流式细胞仪结果显示高浓度As2O3纳米粒的诱导凋亡作用(14.62%、32.69%)明显强于亚砷酸(5.89%、24.14%)。③免疫组织化学和RT-PCR结果显示亚砷酸和As2O3纳米粒子均对SMMC-7721肝癌细胞的Bcl-2基因的表达有抑制作用,对Bax基因的表达有促进作用(Bcl-2/Bax比值降低)。RT-PCR示在低浓度时(2μm/L),两者的抑制和促进作用相近,但在高浓度时(10μm/L),As2O3纳米粒子的作用明显强于亚砷酸。
[结论]:①采用溶胶-凝胶法可将As2O3制备成纳米粒子;②体外细胞实验证实As2O3纳米粒子抗肝癌细胞的效应强于亚砷酸溶液;③免疫组织化学法和RT-PCR实验显示As2O3纳米粒较强的诱导肝癌细胞凋亡作用可能与其改变Bcl-2和Bax基因表达(Bcl-2/Bax比值降低)有关。本研究可能为临床治疗肝癌提供新的方法。