【摘 要】
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脊髓损伤通常会导致损伤部位运动和感觉神经功能损失,长期的神经缺损可导致大量神经元凋亡,造成不可恢复的损伤。凋亡过程涉及许多因子,如Caspase-3、Bax、Bcl-2和c-kit,其中
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脊髓损伤通常会导致损伤部位运动和感觉神经功能损失,长期的神经缺损可导致大量神经元凋亡,造成不可恢复的损伤。凋亡过程涉及许多因子,如Caspase-3、Bax、Bcl-2和c-kit,其中Caspase-3是一种半胱氨酸酶,在哺乳动物细胞凋亡中直接执行死亡命令;Bax和Bcl-2同为Bcl-2家族成员,Bax促进细胞凋亡,而Bcl-2通过拮抗蛋白水解酶(Caspase家族)活性抑制细胞凋亡;c-kit作为一种原癌基因在一定程度上可以抑制凋亡。此外,细胞凋亡过程中有一些未知基因参与,它们也许在脊髓损伤后细胞凋亡过程中发挥重要作用,造成脊髓损伤修复存在物种差异。为探究高等动物损伤修复困难的原因,利用免疫组化方法检验中华大蟾蜍脊髓损伤后凋亡相关基因及c-kit的表达,结果显示:(1)损伤后促进凋亡因子(Caspase-3及Bax)随时间变化的规律为先升高再降低(2)抑制凋亡因子Bcl-2表达规律为先降低后升高;(3) Bcl-2/Bax比值的变化趋势与Caspase-3的相反,Bcl-2/Bax比值的升高可能抑制Caspase-3表达;(4) c-kit表达呈现先增高再降低的规律,c-kit表达出现峰值时Bcl-2表达增加,Bax减少,可能c-kit能够抑制凋亡,在损伤后一定程度保护神经细胞。这些差异可能能够促进蟾蜍神经损伤后修复,也是低等脊椎动物较高等脊椎动物再生能力强的原因之一,为哺乳类脊髓损伤后修复方法研究提供一定的理论依据。采用Trizol法提取蟾蜍RNA,优化的RAPD PCR反应程序,对RAPD随机引物进行了筛选,从20条随机引物和3条锚定引物中筛选出多态性好、稳定性高的引物组合作为RAPD分析引物,为进一步进行蟾蜍脊髓损伤后mRNA表达差异性研究提供依据。
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