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鳜(Siniperca chuatsi)是我国一种重要的淡水养殖鱼类,但是各种疾病的发生严重影响着其产量,免疫防治是控制疾病的重要而有效的途径。细胞凋亡是鱼类非特异性免疫调节的一个重要方面,本文对鳜凋亡相关基因进行了克隆鉴定及功能研究。通过构建SMART cDNA文库并结合RACE技术首次在鳜中克隆到三个凋亡相关基因,并采用PCR和Genome Walking的方法克隆这三个基因及其启动子区域。鳜肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(ScTRAIL)基因cDNA全长1359 bp,5′和3′非翻译区分别为112 bp和395 bp,开放阅读框包含852 bp,编码283 aa,基因全长9021 bp,含有6个外显子和5个内含子。启动子区域732 bp,缺乏典型的TATA或CAAT结构,但存在Oct-1、Sp-1、NF-1、RAP-1、C/EBPalp、NF-kappaB和AP-1等潜在的转录因子结合位点。鳜肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体的诱骗受体(ScDcTRAILR)基因,cDNA全长2494 bp,5′和3′非编码区分别为106 bp和1326 bp,开放阅读框包含1062 bp,编码353 aa,基因全长10437 bp,含有10个外显子和9个内含子。启动子区域804 bp,缺乏典型的TATA框或CAAT盒,但有一些特异的转录因子结合位点,如C/EBPalp、Sp-1、Oct-1和GATA-1等。鳜Mst3和SOK1相关激酶(ScMASK)基因,cDNA全长1743 bp,5′和3′非编码区分别为161 bp和364 bp,开放阅读框包含1218 bp,编码405 aa,基因全长8561 bp,包含有9个外显子和8个内含子。启动子区域1526 bp,缺乏典型的TATA框或CAAT盒,存在Oct-1、Sp-1、NF-1、RAP-1、C/EBPalp、NF-kappaB和AP-1等潜在的转录因子结合位点。Southern blotting分析表明在鳜基因组中,ScTRAIL基因为单拷贝基因,在此基础上采用荧光定量PCR方法揭示ScDcTRAILR和ScMASK基因也是单拷贝基因。对三个基因转录和表达产物的器官组织分布进行了详细的分析。RT-PCR表明这三个基因在健康鳜组织中呈组成型表达,且三者具有不同的组织分布模式。分别构建ScTRAIL、ScDcTRAILR和ScMASK基因的原核表达质粒,通过原核表达、表达蛋白纯化、并制备多克隆抗体,对头肾、肾脏、肝脏、脾脏、肠、皮肤、心脏、脑、鳃和心