背景多药抗药性（Multidrug-r esistance，M DR）是指恶性肿瘤病人或细胞接触某种抗癌药物后，继而对该药物及其他抗癌药产生耐药性，是肿瘤患者或细胞避免抗癌药物毒性作用效应的总称。MDR使肿瘤患者对化疗药物甚至一系列广谱药物的敏感性降低，最终导致肿瘤患者化疗疗效的降低甚至无效。许多学者进行了MDR的相关研究，主要目的是为了研究MDR的分子机制，为MDR逆转提供分子靶点及奠定理论基础，最终治愈肿瘤患者。MDR的发生涉及到细胞膜、细胞质、细胞间隙以及细胞核的结构或者功能的改变。概括起来，肿瘤细胞的耐药机制主要包括以下几个方面，（Ⅰ）细胞吞噬作用的改变，（Ⅱ）细胞膜磷脂类的改变及相互作用，（Ⅲ）细胞膜转运通路的表达和活化，（Ⅳ）增强的药物结合力和胞内积聚，（Ⅴ）胞吐作用的改变，（Ⅵ）MDR相关蛋白的表达和活化，（Ⅶ）离子微环境的改变，如pH、Ca2+浓度等。蛋白质组学是后基因组时代的一个研究热点，尤其是定量蛋白质组学，不仅是诊断疾病、治疗靶点的探索及鉴定的重要工具，更进一步加深了对疾病发生的分子机制的认识与理解。二维电泳和稳定同位素标记是定量蛋白质组学常用的两种基本技术手段。我们前期研究应用二维电泳（Two-dimensional-electrophoresis,2-D E）对食管癌及癌旁组织进行研究，已发现三十多种与食管癌发生发展相关的蛋白。但是，2-DE本身存在着许多技术缺陷和不足，如对偏碱性或偏酸性、分子量过小或过大、难溶的蛋白质的检出敏感性较低，并且消耗时间长、低通量、难以精确自动化和定量等。细胞培养稳定同位素标记（Stable isotope labeling with amino acids in cell culture，SILAC）技术是在细胞培养过程中用稳定同位素标记氨基酸结合质谱技术对蛋白质表达进行定量分析的一种技术，SILAC不但实现了对蛋白质进行定性分析，而且还可以进行精确定量分析，具有样本需求量少、直接、高效、操作简单等特点。所以，稳定同位素标记结合质谱定量分析技术正在逐步取代2-DE技术。食管癌（Esophageal-carcinoma,EC）是世界上常见的恶性肿瘤之一，其流行病学特征是具有显著的地域性，高发区与低发区德发病率相差高达500倍，食管癌的预后极差，中晚期患者的5年生存率仅为10%左右。河南省林州市是世界上食管癌高发地区之一。过去几十年里，许多学者此地区进行了各方面的研究及综合研究，提出食管癌是一个多因素多阶段的复杂过程，目前该地区人群食管癌的发病率和死亡率一直未得到明显改善，仍然是该地区肿瘤患者的主要死亡原因之一。顺铂（Cis-diamminedichloroplatinum，C DDP）和5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil-5-FU）标准化疗方案是目前EC综合治疗的重要手段，但是，治疗效果很不理想，主要原因是由于肿瘤细胞获得了多药耐药性（Multidrug-resistance,MDR），由于耐药性导致了肿瘤化疗的最终失败。因此，鉴定MDR耐药相关蛋白具有重要的理论和实际意义，不仅有助于化疗方案的制定，还能够帮助进一步理解MDR发生的分子机制。目的本研究采用SILAC和高效液相-电喷雾串联质谱（High-performance-liquidchromatography-electrosprayionization-mass-spectrometry,HPLC-ESI-MS/MS）技术，定量分析并鉴定食管癌顺铂耐药相关蛋白，分析研究食管癌顺铂耐药发生的分子机制，丰富和深入理解MDR发生的分子机制，为MDR逆转的新型药物设计提供有价值的分子靶点。方法1、浓度递增法建立食管癌CDDP耐药细胞系EC9706/CDDP；2、S ILAC和HPLC-ESI-MS/MS技术定量分析并鉴定EC9706/CDDP与CDDP敏感的母细胞系EC9706的差异表达蛋白；3、免疫印迹方法（Western blotting, WB）验证食管癌顺铂耐药相关蛋白。结果EC9706/CDDP细胞呈贴壁性生长,增殖缓慢，多形性、异形性明显，耐药指数是3.23。74种差异表达的蛋白质包括能量代谢相关蛋白（11%）、细胞骨架蛋白（20%）、蛋白合成及参与mRNA处理类蛋白(12%)、DNA修复及转录调控蛋白（11%）、氧化还原维持内稳态稳定蛋白（9.5%）、分子伴侣蛋白（8.1%）、核组装相关蛋白（2.7%）、免疫/炎症反应相关蛋白（5.4%）、细胞内转运功能相关蛋白(5.4%)、核糖体结构类蛋白（8.1%）等。小结发现了与CDDP耐药相关的差异蛋白表达谱，包括参与炎症及免疫功能、三磷酸核苷合成、核小体及染色质组装、细胞内蛋白/RNA及离子转运等多个家族的蛋白。表明这些家族的蛋白也参与了食管癌CDDP耐药的发生，提示耐药是多分子参与、多通路调节的复杂过程。