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出于对能源安全和全球变暖的考虑,生物燃料作为一种可再生资源已引起公众的广泛关注,而生物丁醇以其特有的优势体现了能源的多元化和巨大的发展潜力。 本研究以产丁醇的野生菌株丙酮丁醇梭状芽孢杆菌ATCC824(Clostridiumacetobutylicum ATCC824)基因组为模板,用PCR的方法扩增thil、adhE2和BCSoperon基因的全序列,并分别将这三段基因各自插入原核表达载体pTrc99a中,成功构建了重组表达载体pT、pA和pB。将重组质粒转入到E. Coli MGl655中,0.1 mmol/L。的IPTG诱导5 h,经SDS-PAGE蛋白电泳可得到相应的蛋白条带。以重组质粒pT、pA为模板,扩增带有trc启动子的thil和adhE2基因片段,将这两个基因片段插入到重组质粒pB中,成功构建了重组表达载体pBAT。并对重组菌进行酶活测定,其结果显示THL酶活达到0.160 U/mg protein,酶活力提高了26.7倍:HBD酶活达到0.798 U/mg protein,酶活力提高了近4.7倍;CRT酶活提高最显著,达到1.53 U/mg protein;BCD酶活力很低,仅达到0.064U/mgprotein,但与E. coli MGl655相比,酶活提高了32倍;醛醇脱氢酶酶活力达到0.117U/mg protein,提高了1.5倍。以重组菌E. coli pBAT进行发酵培养,采用好氧、微好氧和厌氧三种培养模式,其结果显示好氧培养不产丁醇,微好氧和厌氧均能产微量的丁醇,最高产量为84 mg/L,副产物主要是乙醇、乙酸和琥珀酸。