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RNA解旋酶是在RNA转录后加工过程中起修饰作用的一种酶,其主要功能是利用NTP水解产生的能量修饰RNA的结构。在不同的生物体内都已经证实了RNA解旋酶的存在,RNA解旋酶可以调控RNA转录、mRNA剪切、RNA降解、蛋白质翻译、核糖体发生和组装等与RNA有关的生命活动。近年来,RNA解旋酶在动植物中功能的研究已经成为热点。
前期工作中,本实验室分离了一个编码拟南芥DEAH-box家族蛋白的基因AtRH59的T-DNA插入突变体(atrh59)。该基因的突变导致雌配子体发育迟缓,不能完成正常的受精过程。氨基酸序列分析表明,AtRH59编码一个DEAH-boxRNA解旋酶,该蛋白与酵母中参与核糖体小亚基合成和18SrRNA前体剪接的Prp22p具有很高的同源性。因此,我们推测AtRH59可能参与rRNA的剪接、修饰,进而调控雌配子体的发育。目前对DEAD-box型RNA解旋酶的生化活性已有相关报道,而DEAH-box型RNA解旋酶的活性还未有研究。本研究中,我们对一个含有DEAHbox可能的RNA解旋酶AtRH59的基因进行克隆,对其蛋白进行表达和纯化,通过活性的初步检测,我们发现:
(1)氨基酸序列分析表明,AtRH59蛋白靠近氨基酸N端区域中包含RNA解旋酶所特有的八个保守基序Ⅰ、Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ,因此,AtRH59具有解旋酶家族蛋白的基本特征。
(2)酶活性检测表明,AtRH59具有ATPase活性和依赖于ATP的解dsRNA和dsDNA链的活性,且解链活性受Mg2+浓度的影响。
(3)利用不同结构的dsRNA和dsDNA底物检测AtRH59的解链活性。实验结果表明,AtRH59既能从3’→5’方向开始解旋,也能从5’→3’方向开始解旋,但对平末端的核苷酸双链几乎没有解旋活性。另外,进一步研究发现AtRH59具有微弱的解链极性,能够优先沿3’→5’方向进行解旋。