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目的: 合成多肽偶联壳聚糖，制备多肽偶联壳聚糖川芎嗪纳米粒(多肽壳聚糖纳米粒， pEGF-CS-TMP-NPs)，研究其体外靶向性与靶向分布机制。 方法: 1.氧化降解法制备低分子量壳聚糖。乌氏粘度计测定不同浓度过氧化氢、不同降解时间下壳聚糖的特性黏度，Mark-Houwink方程计算壳聚糖分子量。分析壳聚糖降解前后红外光谱结构表征。 2.以2-亚氨基硫烷盐酸盐为偶合剂制备巯基壳聚糖，优化巯基壳聚糖合成工艺。将表皮生长因子受体(EGFR)特异性配体多肽(pEGF)通过分子内二硫键修饰于巯基壳聚糖表面合成多肽偶联壳聚糖。红外光谱、核磁共振光谱分析产物的结构表征。各产物元素含量通过元素分析仪测定。 3.离子交联法制备多肽壳聚糖纳米粒，透射电镜观察多肽壳聚糖纳米粒的形态，激光粒度分析仪测定粒径、分散度、Zeta电位，高效液相色谱法测定包封率、载药量。 4.体外恒温振荡法模拟体内释药环境，对多肽壳聚糖纳米粒组、壳聚糖川芎嗪纳米粒组（壳聚糖纳米粒）、川芎嗪溶液组释药情况分别进行考察。pH值为7.4、7.0、6.5，于0.5、1、2、4、6、8、10、12、24、48、96、120h取样，高效液相色谱法检测各组药物浓度，计算各组累计释放度。 5.MTT法检测细胞毒作用。选取人肝癌细胞SMMC-7721（EGFR高表达）、人白血病细胞K562(EGFR阴性表达)。分别给予浓度为0.03、0.06、0.12、0.25、0.50、0.62mg·mL-1的多肽壳聚糖纳米粒和相当载体量的空纳米粒，给药48h，吸光度通过酶标仪检测。用origin软件计算两种细胞、两种制剂的IC95。 6.多肽壳聚糖纳米粒体外靶向分布研究。实验组SMMC-7721给予无毒剂量的多肽壳聚糖纳米粒，对照组SMMC-7721给予相应剂量壳聚糖纳米粒以及川芎嗪溶液，K562给予相应剂量的多肽壳聚糖纳米粒。分别作用1、2、4、6、8、10h时取样，高效液相色谱法检测细胞内川芎嗪浓度。给药4h，激光共聚焦显微镜观察各组细胞内川芎嗪荧光强度。 7.竞争结合实验探讨多肽壳聚糖纳米粒靶向分布机制。选取SMMC-7721与K562细胞，给予无毒剂量的多肽壳聚糖纳米粒;对照组选取上述两种细胞，分别用游离pEGF进行处理，再加入多肽壳聚糖纳米粒。作用4h后，各组细胞内川芎嗪荧光强度通过激光共聚焦显微镜检测。 结果: 1.壳聚糖的相对分子质量随降解反应时间的延长而降低，且过氧化氢浓度越大降解效率越高。选取3％过氧化氢、降解90min为反应条件，得到壳聚糖分子量约为3×104作为合成巯基壳聚糖原料。红外结果表明降解后壳聚糖结构单元并没有改变，仅β糖苷键发生断裂。 2.合成巯基壳聚糖。与壳聚糖相比，其红外图谱在1621cm-1新出现-C=N的伸缩振动峰。核磁图谱显示，巯基壳聚糖在δ2.7、δ1.9处出现新的位移值，说明巯基连接到壳聚糖分子表面。在对巯基壳聚糖工艺优化过程中发现，在pH=6.2时，巯基含量较高，并选择壳聚糖与2-亚氨基硫烷盐酸盐的质量比为2∶1用于制备巯基壳聚糖。所合成的多肽偶联壳聚糖核磁图谱与壳聚糖相比，δ7.1，δ7.0，δ6.8处新增加三个位移值，分析此为氨基酸中的芳香氢。元素分析结果显示，多肽壳聚糖中N、S的含量都有所增加，因此可以判断pEGF已偶联到壳聚糖分子上。 3.HPLC法测得多肽壳聚糖纳米粒的包封率为37.66±0.53％，载药量为3.24±0.37％。激光粒度仪测得该纳米粒的粒径为164.3±7.1nm，分散度(PDI)为0.053±0.006，Zeta电位为19.73±2.18mv。多肽壳聚糖纳米粒形态成圆球形，分布均匀。 4.释放度结果显示多肽壳聚糖纳米粒具有缓释作用，当pH为7.4，释放时间120h时，累积释放度达到91％。随着pH值降低，多肽壳聚糖纳米粒累积释放度升高，在pH6.5条件下，纳米粒累积释放度最高。 5.多肽壳聚糖纳米粒对SMMC-7721、K562的0.153 mg·mL-1、0.253 mg·mL-1。空纳米粒对两种细胞的IC95约为0.8 mg·mL-1。 6.经HPLC方法测定，随着给药时间的延长，两种细胞内药物浓度均增加，4h达到饱和。经给药SMMC-7721细胞内浓度由高到低依次为多肽壳聚糖纳米粒组(37.53±0.28μg·mL-1)、壳聚糖纳米粒组(26.67±0.36μg·mL-1)、溶液组(23.51±0.25μg·mL-1)。K562组药物浓度为25.81±0.58μg·mL-1。多肽壳聚糖纳米粒组细胞内浓度与其它组相比均有显著性差异(p＜0.05)。激光共聚焦显微镜下观察发现，实验组细胞内川芎嗪荧光强度显著高于对照组。 7.激光共聚焦显微镜结果显示，加入游离pEGF后，SMMC-7721细胞内药物荧光强度显著降低，K562细胞内药物荧光强度无变化。说明多肽壳聚糖纳米粒的靶向机制是通过特异性识别EGFR进入细胞。 结论: 本实验合成了新型给药载体材料多肽偶联壳聚糖，制备了理化性质稳定的多肽壳聚糖川芎嗪纳米粒，粒径小于200nm，分散均匀并具有缓释作用。体外实验表明该制剂对EGFR高表达的人肝癌细胞SMMC-7721具有靶向性，其靶向分布机制可能是通过细胞表面EGFR介导的细胞内吞作用实现的。