精制抗新城疫病毒卵黄抗体的研制

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多年来,高免卵黄抗体在我国实际畜牧业生产中得到了极为广泛的应用,并取得了肯定的疗效,但由于制备卵黄抗体的高免蛋大部分为非SPF蛋,存在造成多种蛋性传染病传播的隐患,同时其含有大量蛋白质、磷脂等大分子结构的物质,容易引起注射后难以吸收,并会造成肿胀、出血、坏死甚至严重的过敏反应,以上的缺陷限制了其的大规模临床使用以及作为新兽药生物制品制剂的可能。本试验以抗新城疫粗制高免卵黄抗体为实验对象,对卵黄抗体进行脱脂和外源性病毒灭活的处理,以求研究出既适合大规模化生产需要又符合新兽药生物制品申请标准的精制卵黄抗体生产工艺。首先对卵黄抗体进行脱脂处理,采用乙酸—乙酸钠缓冲液(pH为5.0,浓度为0.05mol/l)沉淀法结合超滤法、以及微量表面活性剂沉淀法(PLONIC)两种方法去除卵黄抗体中的脂肪。然后,采用Co60辐照法、温度灭活法两种方法进行外源性病毒的灭活处理,并参考人用血液制品的外源病毒灭活检验标准对精制卵黄抗体的外源性病毒灭活效果进行检验,最后对精制卵黄液进行了安全检验和动物应用试验。结果表明:卵黄原液用0.05mol/l,pH5.0的乙酸—乙酸钠缓冲液1:9倍稀释,搅拌20min,4℃静置10小时后,5000转/min离心30min,回收上清,然后所得上清液经分子量为100KD的有机陶瓷膜超滤后,截留抗体总回收率为83.5%;在卵黄原液与生理盐水的1:3混合液中加入一定量的PLONIC,使其终浓度为0.8%,搅拌20min,4℃静置6小时后,1000转/min离心30min,所的抗体回收率为87%。去脂后的卵黄抗体液经6KGY的Co60射线辐照后,性状稳定,抗体效价不损失,对添加的EDS-76指示病毒(HA=26)的灭活效果达到了灭活标准要求;同时去脂后的卵黄抗体液用60℃水浴10h,处理后性状稳定,对添加的法氏囊指示病毒(106ELD50/ml)的灭活效果也达到了灭活标准要求。同时抗体液无菌,无支原体,无外源性病毒和白血病病毒存在,对鸡胚和14日龄雏鸡安全,抗体消长动态试验表明去脂灭活抗体液普遍达到峰值时间较快,但在体内维持时间与卵黄抗体原液相比较短,说明去脂灭活抗体更容易让生物体进行吸收,但缓释效果较差。新城疫病毒的攻毒动物保护试验结果表明去脂灭活抗体保护效果与卵黄抗体原液相近,而治愈率较卵黄抗体原液较高,病毒灭活处理对抗体的保护率没有产生影响。最后,抗体液的口服试验证明鸡对抗体液的口服不吸收。
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