第一部分雌孕激素对miRNAs调控的初探目的：妊娠的成功依赖于一个健康的子宫，能接受胚泡的植入并支持胎儿的发育。子宫是一个内分泌器官，它能对卵巢所分泌的雌孕激素作出响应，雌孕激素通过与其相应的受体ER和PR结合从而激活下游的靶基因。雌孕激素信号已被证实对于胚泡植入至关重要。MicroRNAs(miRNAs)可以调控基因的表达，并有研究证实miRNAs参与了胚泡植入的过程，但是对于谁来调控miRNAs的表达还知之甚少。由于许多参与植入的关键基因受到雌孕激素的调控，那么雌孕激素是否可以通过调控miRNAs表达进而影响胚泡植入的过程，这是本研究的目的。方法：收取小鼠妊娠第1天（D1）和第6天（D6）子宫内膜组织以模拟雌孕激素调节模型（妊娠D1是E2的高峰期，P4水平低；妊娠D6是P4的高峰期，E2水平低）。提取总RNA后进行microRNA测序，所得到的结果进行生物信息学分析。结果：miRNAs测序发现，妊娠D6与D1相比，有6个miRNA表达上调2倍以上，73个miRNA表达下调2倍以上。通过生物信息学分析，筛选出差异表达miRNAs的靶基因及其所参与的信号通路，这些miRNAs所调控的靶基因多参与代谢、MAPK、紧密连接等信号通路。结论：本研究结果初步反映了在小鼠子宫内膜组织中，miRNAs的表达受到雌孕激素的调控。通过生物信息学分析发现，在妊娠D1和D6中存在差异表达的miRNAs，其调控的靶基因所参与的信号通路均在植入过程中发挥重要作用，提示miRNAs在胚胎着床过程中起一定的调控作用。第二部分mmu-miR-200a过表达对胚胎着床的影响目的：胚泡成功植入需要子宫进入接受态以及激活的囊胚，大量的基因、细胞因子以及其他分子都参与了这一过程。众所周知，MicroRNAs(miRNAs)可以调控基因的表达，而且有研究表明miRNAs参与了调控胚泡植入的过程，但调控此过程的具体miRNA还研究尚少，这值得我们去探索。通过前期研究结果发现，mmu-miR-200a在妊娠D6，即孕激素高峰时表达下调，而且在植入前后具有表达差异，也有研究证实miR-200a在多种子宫内膜疾病（如子宫内膜癌和子宫内膜异位）的表达差异明显。因此，本研究旨在探索mmu-miR-200a在胚泡植入过程中所起的作用及其靶基因，为深入了解胚泡植入的分子机制提供基础，并有可能为治疗女性不孕不育以及开发避孕药提供新的思路。方法：Real Time-PCR检测mmu-miR-200a在妊娠D4、D5和D6子宫内膜以及D5着床点和着床点旁的表达水平，原位杂交检测mmu-miR-200a在妊娠D4、D5以及D6子宫中的表达模式。通过生物信息学分析、基质细胞原代培养及转染和荧光强度分析确认其靶基因为PTEN，免疫组化确定PTEN在小鼠植入过程子宫中的表达定位，宫角注射mmu-miR-200a过表达慢病毒观察植入情况。最后，利用流式细胞术检测转染mmu-miR-200a的对照、模拟物、抑制物后，基质细胞的凋亡状况。结果:应用Real Time-PCR发现在妊娠D5子宫内膜着床点及其旁组织表达差异明显，且在着床点的表达明显低于着床点旁。mmu-miR-200a的mRNA表达水平在妊娠D4、D5、D6子宫内膜中依次下降，且主要表达在基质细胞中，腔上皮及腺上皮细胞表达较少。mmu-miR-200a的靶基因PTEN的表达定位与其相同，但表达水平模式正好相反。宫角注射mmu-miR-200a过表达慢病毒发现胚胎着床率明显下降。流式细胞术检测到转染mmu-miR-200a抑制物后，基质细胞凋亡明显增加，此时PTEN蛋白表达上调；转染mmu-miR-200a模拟物后，基质细胞凋亡明显减少，PTEN蛋白表达下调。结论：研究发现mmu-miR-200a过表达会导致小鼠胚泡植入率的下降。根据mmu-miR-200a与其靶基因PTEN的表达模式以及转染mmu-miR-200a模拟物和抑制物后基质细胞凋亡率以及PTEN的蛋白表达水平，我们相信mmu-miR-200a是通过PTEN调控基质细胞的适度增殖以确保植入正常进行。