胃癌是世界上发病率最高的恶性肿瘤,不论性别,其发病率均占各种癌症首位。尽管胃癌的发病率在下降,但每年大约仍然有一百万的新增病例。黄连素(Berberine),又称盐酸小檗碱,是一种异喹啉类生物碱,可从黄连、三角叶黄连或云连等毛莨科黄连的植物根状茎中提取,是我国常用的中药之一。大量研究表明,黄连素对肝癌、肺癌、大肠癌等多种肿瘤细胞具有抑制作用,但是,到目前为止对黄连素作用机制的报道还比较少。Akt是存在于人类染色体中的鼠类胸腺瘤病毒(t-8 strain from AKR/J mouse,Akt8)致癌基因的同源物,已被定义为癌基因。Akt在PI3K(phosphatidylinositol3 kinase),PDK1(3-phosphoinositide-dependent kinase-1),ILK(Integrin-linked kinase)的作用下发生2个位点的磷酸化。激活的Akt使下游的多种效应分子磷酸化,形成复杂的信号通路,最终影响肿瘤细胞的生长、凋亡、血管生成、侵袭、转移等多个生物学行为。本论文以体外培养的人胃癌细胞系BGC823、SGC7901,及裸鼠荷胃癌模型为研究对象,对黄连素的功效以及调节机制进行了较为深入的探讨。尤其是探讨黄连素对Akt介导的凋亡通路和增殖通路的影响。　　 我们首先采用MTT法分别测定两种细胞系经不同浓度黄连素处理24 h和50μmol/L黄连素处理不同时间后的细胞增殖存活率。结果表明,黄连素对BGC823和SGC7901细胞具有明显的存活抑制作用,它们的增殖存活率与黄连素呈剂量-时间依赖关系。为了探讨黄连素是否具有诱导人胃癌细胞发生凋亡的能力,又经DAPI染色后荧光显微镜观察和Annexin V/PI双染经流式细胞仪检测相结合的方法,观察到黄连素可以有效诱导BGC823和SGC7901细胞发生凋亡。同时,我们还用western blot检测了黄连素对凋亡蛋白PARP蛋白的表达影响。结果发现BGC823细胞中PARP被剪切为cleaved PARP,并且cleaved PARP的蛋白表达量随着黄连素浓度的增加而增强;SGC7901细胞中虽然没有检测到cleaved PARP,但是总PARP随着黄连素浓度的增加而减弱。另外,我们通过PI单染经流式细胞仪检测的方法,结果显示黄连素可以使BGC823和SGC7901细胞周期阻滞于G2/M期。黄连素可使BGC823和SGC7901细胞内周期蛋白cyclinB1,cdc2蛋白表达量上调,进一步证明黄连素能诱导细胞阻滞于G2/M期。进一步,为了阐明黄连素诱导人胃癌细胞凋亡的分子机制,我们采用WesternBlot的方法结合蛋白激酶B(Akt)及相关抗体,对经不同浓度黄连素处理24 h的BGC823和SGC7901细胞Akt mRNA全蛋白进行分析,结果表明黄连素抑制Akt mRNA的表达,Akt的磷酸化蛋白水平的表达。另外,我们对经EGF(20ng/ml)以及转染持续活化Akt(myr-Akt)质粒预处理细胞后进行全蛋白分析,发现黄连素可通过抑制Akt活性导致了p-mTOR,p-p70S6K,p-S6以及p-BAD蛋白水平的下降,细胞线粒体跨膜电位的改变。最后,建立裸鼠移植瘤模型,证实有效剂量的黄连素可以在裸鼠体内抑制BGC823细胞的增殖生长,并同步观察到肿瘤组织p-Akt表达水平的下降。　　 综上所述,本论文的研究结果证实了黄连素具有抑制人胃癌细胞存活增殖及诱导凋亡发生的能力,并且显示黄连素抑制Akt/BAD-线粒体信号通路诱导人胃癌细胞凋亡,或抑制Akt/mTOR/S6信号通路而阻止细胞存活可能是其调节胃癌细胞凋亡的分子机制之一。通过这些研究,较为详细地阐明了黄连素在体内外对人胃癌细胞存活增殖的抑制作用与机制,为其作为抗胃癌药物开发奠定理论基础。