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目的肾细胞癌(Renal cell carcinoma, RCC)占男性新发癌症的4%,在女性新发癌症病例中占3%,与其他实体肿瘤不同的是,肾癌对肿瘤的传统疗法均不敏感,如放射治疗、化学治疗等.但是肾癌被发现是免疫相关的肿瘤,多种免疫治疗在肾癌的治疗中取得了不同程度的成功。本实验通过研究过继细胞免疫治疗(Adoptive cellular immunotherapy, ACI):异体抗CD3分子的单克隆抗体激活的杀伤细胞(anti-CD3monoclonal antibody activated killer cells, CD3AK)对人肾癌细胞株OS-RC-2的体外杀伤作用,以及其对严重联合免疫缺陷(severe combined immunodeficiency, SCID)小鼠人肾癌移植瘤模型的体内抑制作用,从而进一步探讨异体CD3AK细胞对SCID小鼠人肾癌移植瘤治疗的有效性,为异体CD3AK细胞治疗肾癌的临床应用提供理论及实验支持。方法1.人肾癌OS-RC-2细胞株的培养与传代：无菌细胞培养,及时进行换液与传代,定时观察细胞形态与数量,待细胞进入对数生长期时,台盼蓝染色鉴定活力后用于实验。2.于体外条件下建立大量扩增异体CD3AK细胞的培养体系：采集健康志愿者的外周血,体外分离获得外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC),培养获得异体CD3AK细胞；采用流式细胞仪检测CD3AK细胞的表型；3.CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测异体CD3AK细胞对人肾癌0S-RC-2细胞株的杀伤作用；4.建立荷瘤模型：采用左侧腹股沟皮下注射的方法,建立人肾癌SCID鼠皮下移植瘤模型,并通过尾静脉注射异体CD3AK细胞,对照组尾静脉注射磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution, PBS),剂量为0.2m1／只,观察小鼠的生物学特征。SCID小鼠被随机分为四组(n=8)：A组(于荷瘤前尾静脉注射异体CD3AK细胞),B组(A组对照组：荷瘤前尾静脉注射PBS)；C组(荷瘤后尾静脉注射异体CD3AK细胞),D组(C组对照组：荷瘤后尾静脉注射PBS)。隔日测量小鼠的体重、肿瘤体积以观察小鼠体重及肿瘤生长变化；末次治疗结束后24小时处死小鼠,无菌取脾脏、肿瘤组织用于后续实验。5.免疫组化法检测CD3+细胞在小鼠肿瘤组织中的表达情况；计算脾脏指数(脾重／体重),观察异体CD3AK细胞对肾肿瘤生长的抑制作用及其对小鼠免疫系统的作用。结果1.将异体CD3AK细胞与人肾癌OS-RC-2细胞共同孵育12h,用CCK-8法检测可以观察到,随着效应细胞与靶细胞比值的增大,异体CD3AK细胞对OS-RC-2细胞的杀伤活性随之增高。2.A、C组小鼠与其对照组B、D组小鼠比较,A、C组小鼠的脾脏指数显著增大(P<0.05)；A组与C组比较,小鼠脾脏指数无明显差异(P>0.05)；3.A、C组小鼠与其对照组B、D组小鼠比较,A、C组小鼠肿瘤重量显著减小,肿瘤生长缓慢(P<0.05)；A、C组与B、D组小鼠体重均增加,实验(A、C)组小鼠体重较其对照(B、D)组小鼠体重增加的少(P<0.05),4.A组小鼠与C组小鼠比较,A组小鼠肿瘤重量减小,肿瘤生长迟缓(P<0.05)。5.免疫组化方法示,CD3+细胞在C组小鼠肿瘤组织中有阳性表达,其余各组小鼠肿瘤组织未发现有阳性表达。结论1.异体CD3AK细胞对人肾癌OS-RC-2细胞株具有体外杀伤作用；2.异体CD3AK细胞对人肾癌SCID小鼠移植瘤的生长具有显著抑制作用；3.异体CD3AK细胞对人肾癌SCID小鼠移植瘤的发生具有一定的预防作用；4.异体CD3AK细胞能增强人肾癌荷瘤SCID小鼠机体免疫功能并发挥其抗肿瘤作用。