论文部分内容阅读
1、三个金黄色葡萄球菌核酸酶1-110片段的溶液构象和主链运动性研究.金黄色葡萄球菌核酸酶N末端110片段(SNase110),包含残基1-110,处于去折叠态和折叠态之间的动态平衡中,且主要以去折叠态存在.加入氧化三甲基胺(TMAO,Trimethylamine N-oxide),可以使SNase110片段的折叠形成协同稳定的β桶结构.G88W110片段包含核酸酶1-110序列,其88位的甘氨酸被色氨酸替代,V66W110片段包含核酸酶1-110序列,其66位的缬氨酸被色氨酸替代.由于色氨酸的稳定作用,它在生理条件下折叠成稳定协同的结构,其结构与核酸酶天然态结构中相应部分十分相似.G88W和V66W突变主要通过增加β桶的折叠稳定性而TMAO主要通过增强蛋白主链与溶液的疏水相互作用来使蛋白质趋于折叠.计算了G88W110,V66W110和SNase110片段在2.0M TMAO浓度下稳定性热力学参数.用异核多维核磁共振方法,计算了三个片段的溶液三维结构,它们都形成了稳定的β桶结构,α螺旋也初步形成,但都存在一段无序的结构.G88W110的结构最紧凑,而V66W110结构比较松散.G88W110,V66W110和在2.0M TMAO中的SNase110显示出不同的主链弛豫性质,突变和渗透质对蛋白结构和运动性的影响不同,不同的折叠程度反映出不同的弛豫性质,而ms-μs时间的运动可能与折叠的起始位点有关.2、人PDCD5蛋白质核磁共振研究.人类PDCD5(Programmed Cell Death 5)基因鉴定于处于细胞凋亡状态的TF-1细胞,是一个重要的细胞凋亡调控蛋白.表达、纯化并用异核多维核磁共振方法研究了人PDCD5蛋白的溶液构象,人PDCD5蛋白可以在结构上分为三个部分,一个核心区和两个游离区.核心区(N41-Q101)由完整折叠的螺旋束组成;N-末端区域(D3-R40)含圾丰富的二级结构,但是和核心区的没有紧密结合;C-末端延伸包含了一个无规运动无结构区域(Q102-Y125).表达并纯化了人PDCD5蛋白1-26和1-115片段,用圆二色和多维核磁共振方法研究了1-26片段在生理条件下的构象,化学位移和NOE说明人PDCD5蛋白1-26片段的溶液结构和天然态全长片段相应区域类似,3-19号残基由α螺旋组成.用<15>N弛豫实验研究了其主链的运动性.3、几个蛋白的结构基因组学研究.进行结构基因组学的初步的筛选工作,主要根据新基因的大小是否适合核磁共振研究,以及是否含有二硫键,通过生物信息学的查找与预测,从CD34+基因中进一步选择了其中的几个进行表达尝试.从整体上来看,人类基因在原核生物里的表达困难较多,大部分高效表达的蛋白以包含体形式存在.筛选出了人TCTP蛋白并进行了纯化,主链指认已经完成.