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PTX3是第一个被确认的长正五聚蛋白,在20世纪90年代初,PTX3作为内皮细胞和成纤维细胞的细胞因子诱导型基因首次被发现PTX3可以结合到微生物的表面,如烟曲菌以及一些病毒,但是它不能结合到伯克氏菌,肠毒素A和B,也不能结合到LPS,通过对基因修饰对小鼠的研究发现PTX3蛋白在抵抗某些微生物时发挥重要的作用,具有潜在的应用价值。为了筛选出最佳培养基,提高质粒DNA的产量,降低成本,利用单因素法对几种备选基础培养基比较,然后对不同碳源和氮源进行筛选,用Plackett-Burman试验设计对培养基的7种成份进行优化,利用Minitab软件对实验数据进行多元回归分析,建立3种主要因素与质粒DNA产量之间的函数关系。得出结论:单因素法筛选出LB培养基为基础培养基,最佳氮源和碳源分别是蔗糖和酪蛋白胨;PB试验筛选出最佳培养基(酪蛋白胨11.65g/L、蔗糖2.55g/L、酵母提取物5 g/L、氯化铵3.33 g/L、氯化钠10 g/L、磷酸氢二钠12 g/L、磷酸二氢钾2 g/L),质粒DNA浓度350.5 μg/mL,3次重复实验所得的质粒DNA浓度是(350.5±5)μg/mL。为了探究猪源pVAX-ptx3的临床应用,用Omega试剂盒大量提取重组质粒pVAX-ptx3。以500μg/只的剂量免疫新生仔猪36头,同时设置对照组。仔猪断奶一周后各随机挑选3只仔猪,耳缘静脉注射S.suis 2 HA9801(1×108CFU)。对感染仔猪进行外周全血载菌量的检测,以及各脏器活菌载菌量的测定。结果显示:免疫组外周血及各脏器活菌载量显著低于对照组,同时免疫组仔猪的存活率(100%)显著高于对照组(33.3%)。研究结果表明pVAX-ptx3对仔猪具有一定的保护作用,其表达的PTX3蛋白对猪链球菌2型有一定的抗菌作用。为降低重组质粒pVAX-ptx3的生产成本,比较Omega试剂盒和非试剂盒的方法提取重组质粒pVAX-ptx3的临床效果差异。通过响应面法选取的最佳培养基进行宿主菌的培养,分别进行碱裂解法粗提质粒PEG和硅藻土纯化。用Omega试剂盒和非试剂盒的方法大量提取重组质粒pVAX-ptx3,以500 μg/只的剂量分别免疫初生仔猪20头,同时每组设对照组。结果显示:发现硅藻土纯化的质粒杂基因少,且质量高于PEG纯化;用试剂盒提取的质粒在体重增重方面高于对照组,在自然状态下Omega试剂盒提取的质粒的仔猪的发病率(5%)低于对照组(20%),同时非试剂盒提取质粒发病率(0%)和对照组(5%)差异不显著,但是非试剂盒提取的质粒在血液中的炎性因子IL-6和IL-8的含量显著高于对照组。