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目的为提高单核细胞移动抑制因子(MLIF)的活性肽段Cys-Asn-Ser的酶解稳定性和穿膜能力全新设计出两个新型MLIF类似物;采用多肽固相合成法合成出了这两个新类似物及MLIF的小分子活性肽段Cys-Asn-Ser;以阳性药物尼莫地平和母体活性三肽Cys-Asn-Ser为参照,分别考察了两个MLIF新型类似物在脑缺血再灌注损伤方面的保护作用,并初步探讨其机制。方法1.采用引入阳离子基团和置换D型氨基酸等策略,全新设计了两个新型MLIF类似物 D-Cys-Asn-Ser 和 Arg-Cys-Asn-Ser;2.采用多肽固相合成法合成了新设计的MLIF类似物D-Cys-Asn-Ser、Arg-Cys-Asn-Ser 及 MLIF 的小分子活性肽段 Cys-Asn-Ser。采用 Sephadex G10凝胶柱对合成出来的粗肽脱盐,初步纯化后,用半制备型HPLC进一步分离纯化,采用质谱(MS)对纯化产物进行鉴定。3.采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉,建立SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护模型。再灌注24h后采用Zea Longa 5级评分法对模型大鼠进行神经功能评分;评分完成后,大鼠10%水合氯醛麻醉,一部分大鼠断头取脑进行TTC染色,考察大鼠在脑缺血再灌注损伤并给予药物治疗后的脑梗死体积的变化;另外部分大鼠取脑后,取患侧脑组织制成10%脑匀浆,测定脑匀浆中的TNF-α含量,初步探索药物的作用机制。结果与结论1.本研究通过多肽固相合成法合成得到了小分子肽Cys-Asn-Ser以及以该小分子肽为母体新设计的两个新类似物D-Cys-Asn-Ser、Arg-Cys-Asn-Ser,其产率分别为61.2%、64.6%、45.0%,所的产物均通过HPLC做纯度分析(>95%),并采用质谱做定性测定,确定为所合成的目标产物。2.通过SD大鼠脑缺血再灌注损伤保护模型,结果显示,相对于假手术组,实验中的模型组大鼠出现了明显的神经功能障碍,脑切片的TTC染色结果显示脑缺血侧的苍白色的梗死面体积明显,表明动物模型成功。各药物治疗组(包括尼莫地平组)均能够在一定程度上改善模型大鼠的神经功能障碍,也能够很好的改善大鼠缺血侧的梗死状况,明显减小梗死体积,其中阳性药物尼莫地平和母肽Cys-Asn-Ser所表现出的生物活性相当,具备较高的缺血损伤保护作用。由此可见,与原有小分子母肽Cys-Asn-Ser相比,尼莫地平具有和母肽相当的药物活性,而两个MLIF新类似物在脑缺血再灌注保护方面的生物活性有所提高。3.本研究对MLIF类似物对脑缺血再灌注保护的作用机制做了初步探讨,通过试剂盒的方法测定了各组大鼠患侧脑组织匀浆中的TNF-α含量,相对于假手术组,模型组大鼠患侧脑组织匀浆中的TNF-α含量明显升高,而各药物治疗组都在一定程度上明显降低了脑匀浆中的TNF-α的含量,且新设计的两个新兴MLIF类似物在抑制炎性因子TNF-α方面比原有母体三肽活性有所增强。实验结果显示,从延长小分子肽的酶解稳定性和引入阳离子氨基酸以增加其穿膜能力这两个角度对Cys-Asn-Ser进行结构修饰是较成功的改造策略。